注射用双黄连对细菌生物膜影响研究.doc

注射用双黄连对细菌生物膜影响研究.doc注射用双黄连对细菌生物膜影响研究
建立大肠杆菌和金黄色葡萄球菌细菌生物膜(BBF)的模型,考察注射用双黄连对BBF形成的影响及抑制作用。
1 BBF模型的建立
,放入37℃恒温振荡器(230~240转/分钟)中培养8小时,分装在离心管中,%甘油,置于液氮中,于-80℃冰箱中冷藏保存。
大肠杆菌BBF模型建立的方法将置于-80℃冰箱中的大肠杆菌划线于NB培养基的平板上,置于恒温培养箱中,于36℃培养24小时。挑取平板上的单一菌落溶于5mlNB液体培养基中,于36℃恒温振荡器中振荡8小时,得到单克隆细菌增殖培养的菌液,备用。
将菌液稀释100倍置于96孔板中,四周为NB培养基作为空白。置于恒温培养箱中,于36℃培养24小时,取出。将菌液倾出,用蒸馏水反复清洗后,%结晶紫染色30分钟后,将结晶紫倾出,洗净,加入1%脱氧胆酸钠溶液,30分钟后,测其600nm处的OD值。以菌液浓度为横坐标,以OD值为纵坐标,考察BBF生长情况。
影响大肠杆菌BBF生长的因素通过实验的反复摸索,我们发现影响大肠杆菌BBF生长的因素主要有以下几种:①菌种:不同的大肠杆菌菌株对BBF的影响很大,直接影响到BBF的生长与否和BBF形成的好坏。且大肠杆菌传代越多,BBF的生长情况越不好,故我们每次实验均采用大肠杆菌的第二代菌株。
②96孔板的材质:不同的细菌在不同材质的96孔板上的生长情况是不同的。我们选用了市场上常见的三种96孔板分别是进口聚氯乙烯(PVC)板,国产聚苯乙烯(PS)板,进口聚苯乙烯板,大肠杆菌分别在不同材质的96孔板上培养。结果,大肠杆菌在国产PS板上的生长情况是最好的。
③培养时间:考虑到实验操作时间的可行性,我们选定将大肠杆菌分别培养18小时、24小时、36小时,考察BBF的生长情况。结果,大肠杆菌在培养24小时后,BBF的生长情况最好。
金黄色葡萄球菌BBF的建立及影响因素金黄色葡萄球菌的BBF模型的建立方法基本上与大肠杆菌的相同。在这里就不做详细的介绍。我们仍旧分别考察了96孔板的材质、培养时间及菌液浓度等因素,最终确定金黄色葡萄球菌菌液稀释100倍、于国产PS板上培养24小时,BBF的生长的最好且稳定。
培养方法一:考察对BBF形成的影响。
按“96孔板点样方法1”完成后,依照“大肠杆菌BBF模型建立的方法”中置于恒温培养箱中,于36℃培养24小时,以药液浓度为横座标,以平均OD值为纵坐标,作图,考察对BBF形成的影响。
培养方法二:考察对BBF的抑制作用我们先将96孔板全部点菌液,依照“大肠杆菌BBF模型建立的方法”置于恒温培养箱中,于36℃培养24小时,取出,此时BBF已经形成,将菌液倾出,按“96孔板点样方法”,将培养基培养