二研-2011年一季度 VERO细胞狂犬疫苗.ppt

75L细胞反应器生产工艺的建立
重点课题
2010-6
楼觉人
1-3月工作计划
。优化和完善细胞培养阶段中细胞浓度的稳定性,达到接种病毒的要求。
。
,考核细胞培养阶段细胞的生长情况。
。
实验进展
75L细胞反应器的发酵
。
批号为20110101,20110201,20110301。
,抗原量为1:4。

20110101:×106
20110201:×106
20110301:×106
实验进展
利用500ML搅拌瓶制备狂犬细胞毒

批号:20110301;20110302;20110303;20110304。
:16

实验进展
森松公司50L细胞反应器的预试
1. 发现有10%的空载体破损,碎片游离于培养液中。
原因:搅拌系统存在缺陷。
2. 因载体破损,造成培养液渗透压改变,大量的接种细胞裂解。
实验进展
细胞毒株的筛选
病毒株/代次
8
9
10
11
12
13
14
①
1:2
1:2
-
1:2-1:4
1:4
1:4-1:8
1:8
②
1:2
1:2
-
1:2-1:4
1:4
1:4-1:8
1:8
③
1:2
1:2
-
1:2-1:4
1:4
1:4-1:8
1:4-1:8
④
1:2
1:2
-
1:2-1:4
1:4
1:4-1:8
1:4-1:8
⑤
1:2
1:2
-
1:2-1:4
1:2-1:4
1:4-1:8
1:4-1:8
⑥
1:2
1:2
-
1:4
1:2-1:4
1:4-1:8
1:4-1:8
⑦
1:2
1:2
-
1:2-1:4
1:4
1:4-1:8
1:4-1:8
⑧
1:2
1:2
-
1:4
1:2-1:4
1:2-1:4
1:8
实验讨论
。
细胞培养72H左右,镜检发现载体上的细胞有团缩现象,培养液中有游离细胞。
三批次发酵中,提高了通气量,溶氧浓度等,但效果不明显。
存在的问题
5L-5d
30L-2d
30L-3d
实验讨论
2. 20110201发酵的细胞照片
30L-1d
30L-4d
实验讨论
下一步打算
。
初步解决方案:
⑴通气方式:改为下通气方式。必须控制液体表面泡沫的高度。
⑵大幅提高搅拌速度。必须观察载体和细胞生长情况。
实验讨论

工艺基本确定,且每批的病毒抗原量和毒力滴度比较稳定。继续制备细胞毒。

病毒抗原量已有抬头的趋势,继续盲传,传至病毒抗原量稳定且表达量高的毒株。