凝胶过滤中的脱盐柱的使用.pptx

凝胶过滤中脱盐柱的应用
廖红军
凝胶过滤(分子筛)层析概述
是一种由限制分子通过多孔基质,按分子大小分离混合分子的技术;
凝胶过滤主要可以用在两个领域:1、组群分离,根据大小的范围将样品的成分分成两个主要组群,主要应用于除去样品中高分子量或低分子量污染物(如细胞培养液中酚红)、脱盐或更换Buffer;2、生物分子高分辨组分的收集(根据生物分子的分子量差距进行分离);
凝胶过滤分离原理:空间排阻
常用于脱盐的介质
Sephadex G-10,非常适合于分离生物分子,如从小分子(分子量大于100)中分离肽段(分子量大于700);
Sephadex G-25,主要用于球蛋白组群分离,尤其适合分子量大于5kd的脱盐或其他小分子污染物的去除;
Sephadex G-50,适合从小分子(<)中分离大分子(>30kd)物质。
材料特性
Sephadex是由3-氯-1,2-环氧丙烷(epichlorohydrin) 和葡聚糖交联加工成珠状的介质。下图是Sephadex的部分结构:
交联度不同产生了不同的Sephadex填料,影响了他们的溶胀程度和对特定分子大小的选择性
脱盐柱的一些参数
处理量:30%总柱体积;
样品浓度一般不超过70mg/ml,粘度过大,粘度的变化与温度有关;
柱高:10cm;
优点
一般生物大分子的分子量比盐等小分子大许多倍,用凝胶过滤方法为生物产品脱盐十分简单、可靠;
层析方法可透过紫外和电导检测器监控整个层析脱盐的过程、产品的纯度和回收率,又可以连续自动进样和收集,自动化程度高,容易放大;
运行周期短,大多数蛋白回收率>95%;
化学稳定性
Sephadex在所有常用的缓冲体系中稳定,以及添加剂,如离子和非离子去污剂、变性剂(8M尿素或6M盐酸胍);
在短链醇类中稳定,如乙醇、甲醇、丙醇,但是超过25%浓度不经常使用;
注意: Sephadex在醇类中填料会收缩;
一般保存在4~25 ℃20%乙醇中,不要冰冻, NaOH中, NaOH是抑菌的,该溶液非常好去除,而且填料不会收缩。
选择脱盐介质要考虑的因素