a-淀粉酶实验 - a-淀粉酶的固定化与淀粉水解作用的检测.ppt

a-淀粉酶的固定化与淀粉水解作用的检测
北京川布兰生物技术开发有限公司
知识结构
二、a-淀粉酶的固定化与淀粉水解作用的检测
一、固定化技术基础知识
一、固定化技术基础知识
固定化技术:利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术,包括吸附法、包埋法、化学结合法(将酶分子或细胞相互结合,或将其结合到载体上)。
包埋法
化学结合法
物理吸附法
细胞多采用包埋法固定
酶更适合采用化学结合和物理吸附法
固定化
反应方式
不管是固相柱还是固相悬浮体,回收后,在一定条件下贮存,还可以利用。
,柱留出液即为酶催化的产物。
,一定时间后溶液即成酶催化的产物。
实验原理
α-淀粉酶
β-淀粉酶
糖化淀粉酶
淀
粉
糊
精
麦
芽
糖
葡
萄
糖
二、α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测
运用吸附法将α-淀粉酶的固定在石英砂上。一定浓度的淀粉溶液经过固定化的α-淀粉酶催化后,生成糊精,使流出液加入KI-I2指示液后呈红色,表明水解产物糊精生产。
固定化装置—层析柱
实验材料制备
5mmol/L KI-I2溶液
。加蒸馏水100ml。
a-淀粉酶的固定化
在烧杯中将5mg a-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中。再加入 5g石英砂,不时搅拌,30分钟后装入层析柱中。
用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱以除去未吸附的游离淀粉酶,流速控制为1ml/min。
可溶性淀粉溶液
取50mg可溶性淀粉溶于100ml热水中,搅拌均匀。
实验步骤
,用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱,放置在4℃冰箱里,几天后再重复上述实验,看是否有相同结果。
,用滴管滴加淀粉溶液, /min的流速过柱。在流出5mL后接收2mL流出液,加入1-2滴KI-I2 溶液,观察颜色。用水稀释1倍后再观察颜色。
吸附有α-淀粉酶的石英砂
淀粉溶液
HST
层析住