微生物的显微镜直接计数法.ppt

实验三
微生物的显微镜直接计数法和大小的测定
实验目的
学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。
学数板测定微生物数量的方法。
实验材料
显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、无菌滴管、吸水纸、擦镜纸。
实验步骤
测定酵母菌细胞的大小测定的工具:目镜测微尺镜台测微尺
目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍数而改变,也会因使用不同的显微镜而产生误差,因此在使用前必须用镜台测微尺进行校正。
目镜测微尺的每格长度(μm)=镜台测微尺×10/目镜测微尺
酵母菌显微直接计数
方法:活菌计数法——平板菌落计数法;总菌计数法——血球计数板或霍瑟(Peroff Hausser)细菌计数板(二者原理和部件相同,只是厚薄不同而已)。
细胞数/ml=100小格内细胞总数÷100×400×10×1000×稀释倍数
细胞数/ml=80小格内细胞总数÷80×400×10×1000×稀释倍数
取清洁无油的血球计数板,在计数室上面加盖血盖片。
取酵母菌液,摇匀,用滴管由盖玻片边缘滴一小滴,使菌液自行渗入,计数室内不得有气泡。
用4×镜观察并将计数室移至视野中央。
在4×镜下计数:计数4个(或5个)中格的平均值,然后求得每个中格的平均值。乘上16(或25)就得出计数区总菌数,最后再换算到每mL菌液中的含菌数。
注意事项:计上不计下,计左不计右。出芽计一半
实验结果
目镜测微尺标定结果: ×目镜下倍物镜目镜测微尺每格长度是μm。
菌号
酵母的直径大小测定结果
目镜测微尺格数
实际直径/µm
1
2
3
4
5
均值
将显微计数结果记录于下表中。T表示五个中方格中的总菌数;D表示菌液稀释倍数。
各中格中菌数
T
D
二室平均值
个/ml
1
2
3
4
5
第一室
第二室
问题与讨论
为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来校正?
在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点?
本次实验课结束请确保血球计数板清洗干净!请值日生同学留下值日下周再见!