凝结芽孢杆菌.pptx

一、凝结芽孢杆菌
1、分类地位
2、用途意义
3、培养基
4、培养条件
5、技术关键
1、分类地位
1、凝结芽孢杆菌是乳酸菌的一种。
2、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)呈杆状,两端钝圆,革兰氏阳性菌,过氧化氢酶阳性,芽胞端生,无鞭毛。
3、最适生长温度为45~50℃,最适pH ~。其能分解糖类生成L- 乳酸,为同型乳酸发酵菌。
4、凝结芽孢杆菌除具有和乳酸菌及双歧杆菌同样的保健功效外,还具有耐酸、耐热、耐盐、容易培养和保存的特点
5、菌株在YPD 培养基上生长良好, 48 h 形成直径2~3 mm 大小的圆形菌落, 白色而有光泽, 表面湿润、平坦, 边缘整齐。油镜观察, 菌体形态为杆状, 单个、成对或链状排列, 芽胞端生。
6、凝结芽孢杆菌经90℃,60min 湿热处理和120℃,60min 干热处理,其活菌数只下降了一个数量级;将其置于pH 的酸性溶液中,存放一年后,其存活率仍高达105;凝结芽孢杆菌在1%~7% NaCl 溶液中均可存活4 周以上,其在8% NaCl 溶液中能存活一个月。但凝结芽孢杆菌在低pH 值条件下,其抗逆性会下降。例如在酸性条件下(),凝结芽孢杆菌孢子对热几乎没有耐受性,而且生长受到抑制。此外,Cerrutti 等也发现在pH 条件下,凝结芽孢杆菌的生长受到抑制。
2、用途意义
1、对胃肠道炎症有一定治疗作用。
2、调节动物消化道的微生态平衡。
3、促进动物机体的消化作用。
4、改善动物机体免疫功能, 提高抗病能力。
5、促进动物生长、降低死亡淘汰率和饲料增重比。
6、人体保健作用包括:提高消化道对膳食纤维的有效利用率,防止脂肪分子的过度吸收(降脂作用);减少患冠心病的危险;抗便秘;预防沙门氏菌、轮状病毒、副溶血弧菌等致病微生物引起的腹泻。
3、培养基
1、分离培养基(MRS 培养基):胰蛋白胨10 g、牛肉膏10 g、柠檬酸二铵2 g、乙酸钠5 g、酵母粉5 g、葡萄糖5 g、磷酸二氢钾2 g、吐温80 ml、碳酸钙20 g、 g、 g、水1 000 ml, 调pH ~, 115 ℃灭菌20 min。
改良MRS 培养基: 在MRS 培养基基础上添加α-甲基葡萄糖苷10 g、山梨酸钾1 g, 调pH ~,115 ℃灭菌20 min。
2、凝结芽孢杆菌增殖培养基(YPD 培养基) : 葡萄糖20 g、胰蛋白胨20 g、酵母粉10 g、水1 000 ml, , 115 ℃灭菌20 min。
3、固体培养基: %的琼脂。
4、种子培养基(W/ V) : 蛋白胨10 g/L, 酵母浸出物5 g/ L, 氯化钠10 g/ L, 固体培养基再加琼脂15 g/ L, 自然pH。
5、基础发酵培养基(W/ V) : 蔗糖10 g/L, 蛋白胨10 g/ L, 磷酸氢二钠2 g/ L, 磷酸二氢钠2 g/ L,pH 7. 0。
4、培养条件
1、分离纯化:将药片粉碎加入到10ml无菌试管中,加入灭菌的蒸馏水,震荡摇匀,静置。取上清2ml加入到改良MRS 培养基中,37 ℃静置培养。然后从每个样品取2 ml, 80 ℃水浴5 min ml转接乳酸菌增殖培养基固体平板, 37 ℃培养。待菌落长出,随机挑取菌落,纯化,编号并保存。
2、接斜面:将分离的菌种转接到种子斜面培养基, 40 ℃培养24 h, 备用。
3、种子液的制备:取一环活化的菌种, 接入装液量为50 mL YPD液体培养基的250 mL 三角瓶中, 40 ℃, 180 r/min,培养18 h。
4、摇瓶培养:分别取1 mL( 接种量为2% , V/ V) 种子液,接入盛有50 mL 培养基的250 mL 三角瓶中。置摇床中, 30 ℃振荡培养12 h, 转速为160 r/ min。
实验条件优化
5、优化后的培养基配方为:酵母粉3g/L,蛋白胨5g/L,牛肉膏2g/L,,NaCl 2g/L,K2HPO4 3g/L,MgSO4 ,在此培养基基础上进行发酵条件的优化,得出优化后的培养条件为:温度40℃,,转速210r/min,装液量为30mL(250mL的三角瓶),接种量为6%(v/v),发酵时间48h。