农药残留的测定方法.ppt

色谱检测法Chromatographic Technique
气相色谱
液相色谱
柱色谱法
Column Chromatography
平面色谱法
Planar Chromatography
经典 LC
高效 LC
纸色谱 PC
薄层色谱 TLC
液固 LSC
液液 LLC
离子交换 IEC
排阻色谱 SEC
生物检测技术 Biological Technique
免疫分析技术
农药残留测定
第四节农药残留测定方法
分子印迹技术
残留农药
目前大量应用
较少
新方向
一、免疫分析技术
免疫分析法是利用抗原和相应抗体在体外也能特异性结合的原理发展起来的特异、灵敏、快速检测技术,由于其内在优势,广泛应用于包括农药残留检测在内的诸多领域。
用免疫分析法检测农药残留,所面临的两个主要问题是农药抗体的制备和所制备抗体的特异性。农药是小分子化合物,其本身不能使动物产生抗体,只有适当的载体蛋白偶联成大分子物质,才能诱导免疫动物产生相应抗体。因此,制备质量稳定的农药抗体具有相当的难度。
(一)ELISA 概述
Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA
脊椎动物的免疫系统能够产生抵御外来异物入侵的抗体。
免疫反应是机体识别和排除进入体内的抗原性异物的保护性反应。免疫反应,不仅发生在生物体内,在体外也可进行,且反应是高度特异(即对特定结构的农药选择性)、高度灵敏(pg ~ mg级)、定量进行。农药残留免疫分析方法开发过程复杂,周期较长(至少半年),但一经开发成功,就表现出简单、快速、灵敏的优势。整个测定反应可在试管及微孔板上进行,在96孔板上可同时制作标准曲线,测定对照样品和一批样品,最后用比色法定量,还可做成试剂盒或检测试纸,解决现场农药残留测定问题。
1、抗原——抗体结合位点
Antibodies are proteins that bind very tightly to their targets (Antigens). They are produced in vertebrates as a defense against infection. Each antibody molecule is made of two identical light chains and two identical heavy chairs, so the two antigen binding sites are identical.
Light chain
Heavy chain
Hinge
Antigen-binding sites
THE ANTIBODY MOLECULE
2、抗原抗体反应的特征——“Lock and Key”模式
ATIBODY SPECIFICITY
An individual animal can make billions of different antibody, each with a distanct antigen-binding site. Each antibody recognizes its antigen with great specificity.
Heavy chain
Light chain
Antigen
3、抗原抗体结合的最佳比例
Antibody Excess
Antigen Excess
Equivalence
Optimum Proportion of
Antibody and Antigen
4、抗原抗体反应的最佳温度条件
免疫法的优势—不同方法测定除虫脲的结果比较
基质
测定
方法
取样量
/mL
净化
步骤
检测限
//mg/kg
分析样品数// 个/人·天
消耗试剂
和费用比例
水
GC
250
5
10
5
30
免疫法

不需
1
50

牛奶
LC
20
19
50

90
免疫法

不需
40
50

(二)ELISA的基本原理
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫活性,酶标记抗原或抗体既保留其免疫学活性又保留酶活性。应用该方法测定时首先需要将抗原或抗体固定于合适的载体上,并保持其生物活性;然后使抗原或抗体与某种酶(辣根过氧化物酶)连接,这种酶标抗原或抗体同时具有免疫活性和酶活性;待测样品和酶标抗原或抗体与包被抗原或抗体经过一系列反应后,用洗涤的方法将固相载体上的复合物与其它物质分离,最后加入酶底物,复合物上的酶催化底物使其水解,氧化或还原为有色产物,产物的量与标本中受检物质量直