网织红细胞计数.doc

10-网织红细胞计数
BDIS Retic-COUNT(Thiazole Orange)Catalog No. 349204
简介
早期红细胞细胞核丢失后,胞浆内仍残留有细胞器(如核糖体、线粒体),这样的早期红细胞就是网织红细胞,它有别于不含细胞器的成熟红细胞。这些细胞器富含核酸物质(RNA和DNA),而在成熟红细胞中不含有此种物质。
正常人(非贫血者)中,网织红细胞在骨髓中三天成熟,第四天出现在外周循环血中。网织红细胞计数可以评估红细胞造血系统活性,但是如果网织红细胞的骨髓成熟时间缩短而循环血成熟时间延长,这种评估方法就会有误差。这时,外周血相中一至三天的网织红细胞(“漂移”网织红细胞)也会被当做第四天网织红细胞而计算在内。如遇此种情况,应当对“漂移”网织红细胞做修正(修正公式见流式细胞仪分析一节)。
BD公司生产的Retic-COUNT试剂主要成分为噻唑橙(TO),与丫啶橙(AO)的作用类似。TO与DNA碱基对以1:2的比例结合,分解常数、正电荷数和膜通透性与AO相近。Retic-COUNT试剂既可与DNA结合,也可与RAN结合,形成的荧光-核酸复合物,吸收光谱为475nm,荧光发射光谱为530nm,因此,适合在安装了488nm激光的流式细胞仪上使用,如FACSCalibur,FACSort,FACScan等。
网织红细胞计数的传统方法是使用新亚甲基蓝染料,染色涂片后,光镜下计数。但此方法费时,且由于只计数1000个细胞,因而存在固有的取样误差。
使用Retic-COUNT流式细胞术方法进行网织红细胞计数,与传统的新亚甲基蓝方法相比,存在很多优势。使用流式细胞术,可以检测上万个细胞,具有很好的取样精确性。由于使用的是细胞悬液,可以消除涂片时的分布误差。同时,它还具有省时、操作简便等优点。另外,由于可以使用配套的Retic-COUNT自动软件,不需要做阴性对照,还可以减少操作的变异性。
临床意义
网织红细胞计数在临床上可以提供评估骨髓相中的红细胞造血功能的信息。在贫血的鉴别诊断中有很重要的作用。
贫血患者骨髓功能正常,而网织红细胞增加,多见于内源性溶血性疾病,如镰状细胞溶血性贫血、地中海贫血、球状细胞溶血性贫血、6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺陷、免疫性溶血、脾功能亢进等。失血时网织红细胞亦升高,因此,网织红细胞也可以作为隐性失血的指标。
贫血患者网织红细胞正常或减少,多见于红细胞造血系统受损,病因是骨髓内红细胞成熟或生成异常,如免疫性或药物导致的红细胞发育障碍;肿瘤转移;红细胞生成产物减少;缺铁、叶酸、VB12导致的贫血。
对于病人的治疗管理,网织红细胞计数也具有很重要的作用,可以用来监测原发性骨髓纤维化患者;评估补充铁、叶酸、VB12后病人的反应情况;监测骨髓移植过程;监测化疗和放疗对造血功能的损害。
Retic-COUNT网织红细胞计数原理
Retic-COUNT试剂与外周全血混合,进行细胞染色,试剂与网织红细胞内残存RNA和DNA结合。染色后的样本在流式细胞仪上进行获取,细胞通过流式细胞仪的流动池时,在激光的激发下发射出散射光信号(FSC和SSC,对数取样)和荧光信号(FL1)。获取细胞10,000-50,000个,数据文件按照List Mode保存。
使用Retic-COUNT或CELLQuest软件进行数据分析