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蚌埠医学院
毕业论文
题目: 两种间日疟原虫重组蛋白的诱导表达及免疫学活性鉴定

姓名: 宣汉军
专业: 生物科学系
年级: 07级
学号: **********
指导教师: 方强
蚌埠医学院教务处制
2011年 6 月 13日
目录
一、中文摘要、关键词 3
二、英文摘要、关键词 4
三、论文正文 5
前言 5
材料与方法
1)第一部分 7
2)第二部分 14

1)第一部分 12
2)第二部分 15

1)第一部分 13
2)第二部分 15
17
18
两种间日疟原虫重组蛋白的诱导表达及其免疫学活性鉴定
摘要
目的:醛缩酶(PvALD)和间日疟原虫裂殖子主要蛋白(PvMSP)基因的表达和纯化及其免疫鉴定。用纯化的PvALD和PvMSP重组蛋白体外活化扩增间日疟既往感染者外周血淋巴细胞,进行免疫鉴定,以探讨T细胞抗PvALD和PvMSP重组蛋白免疫反应。
方法:将PvALD和PvMSP基因克隆入原核表达载体pET28a中,构建重组表达载体。以重组载体转化大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下表达PvALD和PvMSP重组蛋白,超声波破菌,分离上清和沉淀,PvALD取沉淀经过蛋白复性,稀释成液体和PvMSP上清经亲和层析柱纯化,再通过快速液相蛋白层析分离系统进一步纯化并检测其纯度,采用SDS-PAGE电泳和Western-blotting对目的蛋白进行分析和验证。
结果:成功构建重组质粒,并在大肠埃希菌中诱导蛋白表达。进一步优化条件后大量表达,经过纯化后,表达的重组蛋白能与间日疟患者血浆发生特异性结合反应。
结论:成功克隆表达了PvALD和PvMSP重组蛋白,并且两种重组蛋白均具有良好的免疫学活性。
关键词:醛缩酶间日疟原虫裂殖子主要蛋白重组蛋白
Two Plasmodium vivax binant protein expression, purification and immunological identification of
ABSTRACT
Objective:Aldolase(PvALD) and Plasmodium vivax merozoite major protein (PvMSP)gene expression and purification and immunological identification of. PvALD with purified binant protein in vitro activation and expansion PvMSP vivax past infection of peripheral blood lymphocytes, the immune identified, to explore the different subsets of T cells against PvALD and PvMSP binant protein immune response. Detection of anti PvALD and PvMSP binant protein immunoglobulin type.
Methods: PvALD and PvMSP gene was cloned into the prokaryotic expression vector pET28a to construct the binant expression vector. The binant vector was transformed into E. coli BL21, induced by IPTG, binant protein expression PvALD and PvMSP, ultrasonic broken, isolation supernatant and pellet, PvALD take precipitate after refolding, the supernatant was diluted into liquid and PvMSP purified by affinity chromatography , And through fast protein liquid chromatography system and determine the purity and further purified by SDS-PAGE electrophoresis and Western-blotting for protein analysis and verification.
Results: Th