核糖核蛋白SSB的分离纯化及ELISA检测方法的研究.pdf

华南理工大学
硕士学位论文
核糖核蛋白SSB的分离纯化及ELISA检测方法的研究
姓名:向文斌
申请学位级别:硕士
专业:制糖工程
指导教师:罗发兴;王继华
20040501
摘要由于动物组织中含量较低,且常与其它蛋白相结合,这就显现出了分离纯化的必要性,以便达到临床检测所需灵敏度及特异性。在硫酸铵盐析中,斑点免疫印迹法检测抗固逄匾煨员砻鳎%/%段的盐析馏份活性较高;经甈缬究煽闯觯ィザ蔚盐析馏份的杂带较少,其中一条色带呈现出宽且浓的特征,而其它色带则很浅淡。经分子量比较,该宽且浓的色带分子量为左右,证明此段卸锥翁荻认赐眩赐蚜魉傥猯/倍許蛋白的单步收率利用鞍子際生物亲和的特性,进行比阴离子交换更为精细流速:/皇占娓瘢~/S纱瞬僮魈跫苫竦每箂抗体特异性较高,纯度达%,且单步收率为.%,总收率为。经免疫学鉴定,完全适合临床上检测的要求。对纯化后鞍椎睦砘灾示浣覧检测表明,本实验室自制的较强反应活性:一℃保存鲈拢诖说臀孪驴煞锤炊橙次;嫣跫鞍子肴薙蛋白既有高度的同源性,又保持了天然全抗原的生物活性,因而在临床检测中应用较广泛。获得鞍椎闹匾@丛词嵌镒橹本文根据鞍椎奈锢砘灾剩捎猛眯叵俦7畚T希捎萌步生化提纯程序蛩犸а挝觥亲和层析辛朔掷氪炕ひ盏娜妨ⅰMü馊讲析,可把细胞中大量杂蛋白除去,从而获得高纯度,高收率%目乖許蛋白。层析对于鞍椎姆掷胱阌行У摹趵胱咏换徊阄鲋校岳胱咏换患恋奈饺萘考洗脱分离条件分别进行了优化试验,结果表明:进样蛋白质浓度为进样体积为,进样流速控制在/反硪何/.;用洗脱液为含最高%F湎赐逊逯械诙宓腟蛋白含量较高,鞍椎奶匾煨砸较强。经甈缬痉治觯渌拥鞍咨ù飨员攘蛩犸а挝鑫锷佟的纯化。从中摸索出了能获得高收率鞍浊揖哂薪锨靠筍抗体活性、纯度更高的纯化工艺。缀筒阄鍪笛榻峁貉废∈./幌赐鞍自谙铝凶罴巡僮魈跫拢匀槐3至擞氩∪/,/
抗体血清的问接椒ā>秸笫笛楸砻鳎灾芐蛋白包被浓度适宜ḿ觳獾拿舾行约疤匾煨员壬逃肧蛋白包被的ḿ觳夂ḿ觳馇浚屎狭俅舱锒嫌τ谩可保存鲈拢涸嫣跫驴杀3;在℃加热后,则鞍完全失活。在之间鞍咨锘钚越细摺蛋白对胰蛋白酶特别为了将自制鞍子τ糜诹俅布觳猓疚脑谑笛槭医⒘思觳饪筍量为/:阳性血清稀释度为;酶标抗体稀释度为7獗液采用バ孪市∨QG逵%旌衔铮皇笛槭伊俳缰甇。将自制鞍子肷逃肧蛋白包被酶标板的觳庖约凹浣ê蚖法进行对比,结果均表明:自制鞍装幻副臧褰⒌关键词:分离纯化:干燥综合征;敏感。华南理工大学硕士学位论文
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刷谧锄弱盒圃款华南理工大学学位论文原创性声明学位论文版权使用授权书作者签名:、’诧騣日期:泸暾荚拢琭日不保密哪作者签名:、匀支烈’期:[月保密口,在一年解密后适用本授权书。本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权华南理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于朐谝陨舷嘤Ψ娇蚰诖颉啊獭
第一章绪论鞍椎难芯肯肿鞍椎慕峁,是哺乳动物细胞核的白构成,其抗原性在蛋白质部分。其中仅有少数几种被鉴定,如、疞/、取O低承宰陨砻庖呒膊如干燥综合症、系统红斑狼疮⑿律谴酆现、类风湿关节炎、亚急性皮肤型红斑狼疮患者难G逯杏卸嘀趾说鞍赘春衔的自身抗体⋯,虽然其发病机制和病理作用,为临床上检测这些疾病的研究提供理论依据。临床上抗固宓募觳舛韵低承宰陨砻庖呒膊〉募稹⒄锒虾椭瘟贫加兄匾W饔谩鞍追肿有灾视虢峁固氐愕难芯砍晒F浣峁构δ芗捌淞俅布稹⒄锒虾质不同的抗体,分别称为蚐抗体。后来仍赟病人的血清中自身蛋白如认嗔印,”,形成较大的帕即为蛋白鹱陨免疫反应,产生自身抗体。组成乖腞是嗑勖窱的转录物。某墒臁】,还能与腺病毒、病毒相关的岷稀蛋白与小细嗑勖窱转录的终止。乖ü缓蜍盏’·端与樱在紫光作用下与鸾涣W饔谩蛋白在ざ擞幸桓鯱的皍可提取性核抗原生理盐水抽提物。它包括多种核抗原成分。这些核抗原均由小分子牒说在发病机制中的作用尚不清楚,但在一定的