实验五福医大计数.ppt

。其生成受血小板生成素(TPO)的调节。正常静息状态下,血小板为双面微凸的圆盘形,直径2~4μm、。染色后镜下可见血小板的胞质呈淡蓝色,内含较多的紫红色嗜天青颗粒。血涂片上,为红细胞数的1/30~1/20,通常每个油镜视野可见7~35个,分散或3~5成群分布。(1)原理血液(20μl)经稀释液()按一定比例稀释和破坏红细胞后,充入血细胞计数池内,在显微镜下计数一定范围内的血小板数,经换算求出每升血液中的血小板数量。由于血小板易黏附、聚集以致破坏,优质的血小板稀释液应具备的条件是:(1)有效地阻止凝血。(2)很快地固定血小板,防止血小板聚集和变形。(3)溶血稀释液要求红细胞破坏完全。(4)组成简单、容易保存、不长细菌。根据所采用的稀释液不同而又分为破坏红细胞稀释法(溶血法):草酸铵溶血法:对红细胞破坏力强,血小板形态清楚。为首选常规计数方法。复方尿素溶血法:尿素可溶解红细胞、甲醛可固定血小板和防腐,稀释后血小板胀大易辨认,尿素容易分解,试剂容易失效。尿素不能完全破坏红细胞。高铁氰化钾溶血法:试剂稳定易于长期保存但不能完全破坏红细胞。不破坏红细胞稀释法:复方碘稀释液。红细胞未破坏及试剂易细菌生长,干扰计数,已被淘汰。实验五血小板计数(2)操作步骤1)吸取稀释液:准确吸取10g/。2)采血:准确采血20μl加入上述试管,立即充分混匀。3)静置:待完全溶血后再混匀1min。4)充池:混匀血小板悬液,并取1滴充入血细胞计数池,静置10min。5)计数:用高倍镜计数中央大方格内的中央及四角共5个中方格内的血小板数量。实验五血小板计数(3)计算血小板数/L=N×5×10×20×106=N×109/L参考值:(100~300)×109/L实验五血小板计数(4)注意事项1)稀释液必须符合优质的血小板稀释液,因此稀释液必须新鲜、洁净,无杂物和细菌污染;定期检查稀释液的质量,实验前应先做稀释液空白计数,符合仪器使用说明方可使用。2)器材及操作必须标准化和规范化①所用器材必须校准、洁净、干燥。②采血、充液、计数均应规范,避免血小板激活或破坏。③血小板悬液充入计数池后必须静置15min再计数,并在采血后1h内完成计数。时间过短或过长则可导致血小板未完全下沉或失去光泽,使计数结果偏低。