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细胞染色-Hoechst细胞染色方法

1) 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,%NaCl等溶液洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过夜,使约为50%-80%满。
2) 刺激细胞发生凋亡后,吸尽培养液,,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。
3) 去固定液,%NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次。
4) Hoechst 33258染色液,染色5分钟。也宜用摇床,或手动晃动数次。
5) %NaCl洗两遍,每次3分钟。
6) 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,尽量避免气泡。使细胞接触封片液,切勿弄反。
7) 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
2. 悬浮细胞
1) ,,缓缓悬起细胞,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。
2) 离心去固定液,%NaCl洗两遍,每次3分钟。洗涤期间手动晃动。
3) 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体,再缓缓悬起细胞,滴加至载玻片上,尽量使细胞分布均匀。
4) 稍晾干,使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
5) Hoechst 33258染色液,染色5分钟。用吸水纸从边缘吸去液体,微晾干。
6) %NaCl洗两遍,每次3分钟。
7) 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。
8) H. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
3. 组织切片
1) 常规包埋切片后,脱蜡,透明。
2) %NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次。可在六孔板中操作。
3) Hoechst 33258染色液,染色5分钟。也宜用摇床,或手动晃动。
4) %NaCl ,每次3分钟。
5) 将切片置于载玻片上,滴一滴抗淬灭封片液,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。
6) 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。