细胞染色方法大全.docx

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Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下

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Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下

有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不
大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细
胞固定后再染色，而hoechst33342那么可以对活细胞直接进展染色！
染色步骤
PI(PropidiumIodide碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色
试剂，〔PropidiumIodide,PI〕是一种核酸染料(红
色〕，它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通
透性的增加，，
只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡〔当然晚期凋亡PI亦可着色〕。但是如
果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染
色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够！
annexin-v染色细胞凋亡早期,,磷脂酰丝氨酸
(Annexin-V,PS)外翻,Annexin-V在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.
这样,Annexin-v染色阳性,-V结合不同的荧
光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细
胞凋亡的发生。AnnexinV用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧
光。
JC-1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时那么可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。线粒体本身存在一定的极性
2+、Na+和H+流调控。(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。电位差由Ca
当线粒体状态良好时对JC-l摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在
绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内
JC-l的浓度较高，多以多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membranepotential)，而与线粒体的形态、体积和密度都无关，因而能更好地反映线粒体的功能状态。由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1染色被用于检测凋亡的早期发
生。其实验方法如下。
JC-l染色非常简单。首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1～5mg/ml)，储存于-20℃，用时以培养液稀释至10ug/ml终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培