丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制.ppt

丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制
主讲人:葛静
制作人:胡波
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实验目的
实验原理
实验材料与仪器
实验步骤
实验结果记录
注意事项
实验讨论
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实验目的:
1、学习和掌握竞争性抑制作用的特点。
2、观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。
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实验原理
化学结构与酶作用的底物结构相似的物质,可与底物竞争结合酶的活性中心,使酶的活性降低甚至丧失,这种抑制作用称为竞争性抑制作用。
E+S
ES
E+P
+
I
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EIS
+
I
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琥珀酸脱氢酶:
是机体内参与三羧酸循环的一种重要的脱氢酶,其辅基为FAD,如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下,可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下的氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。这样,便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用
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实验材料与仪器:
器材: 大白鼠、
手术剪、滴管
镊子、纱布、
漏斗、量筒、
烧杯、研钵
刻度吸量管
试管及试管架、
恒温水箱、
试剂:
、


、
1/15mol/LPH=、
%甲烯蓝
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1、酶提取液的制备:取大白鼠的骨骼肌,用冷水洗3次,加入1/15mol/L磷酸缓冲液pH 。在研钵中碾碎,然后用纱布过滤,用干净的烧杯收集过滤的备用。
实验步骤:
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2、取试管6支,编号,在按图步骤操作
酶提取液(ml)
磷酸缓冲液(ml)
(滴)
(滴)
(滴)
(滴)
蒸馏水(滴)
甲烯蓝(滴)
褪色时间(分钟)
试管1
2
—
8
—
—
—
8
3
试管2
2
—
8
—
—
8
—
3
试管3
2
—
8
—
8
—
—
3
试管4
2
—
—
8
8
—
—
3
试管5
—
2
8
—
—
—
8
3
试管6
2
—
8
—
—
—
8
3
试管6:酶提取液在100℃水浴中保温
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,沿试管壁加入液
体石蜡,,各管置于37℃的水
浴中保温,切勿摇动试管,随时
观察比较各试管颜色的变化,
记录褪色时间。
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实验结果记录:
褪色时间(分钟)
[I]/[S]
试管1
试管2
试管3
试管4
试管5
试管6
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