蛋白质含量测定——双缩脲试剂法 实验报告.doc

生物化学实验报告
姓名:

学号:

专业年级:

组别:
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
蛋白质含量测定——双缩脲试剂法
实验日期
实验地点
合作者
指导老师
评分
教师签名
批改日期
实验目的
、操作;
;
;
。
二、实验原理
(H2N-OC-NH-CO-NH2),因分子内含有两个邻接的肽键,在碱性溶液中可与Cu2+发生双缩脲反应,生成紫红色络合物。
(-CO-NH-),同样能在碱性条件下与Cu2+发生双缩脲反应,生成的紫红色络合物,且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10~120g/L范围内有良好的线性关系。
三、材料与方法:
:
:①小牛血清;②;③双缩脲试剂:硫酸酮、酒石酸钾钠、碘化钾;④蛋白质标准液(70g/L);⑤%NaCl;⑥蒸馏水。
:①试管;②烧杯;③容量瓶;④加样枪;⑤刻度吸管;⑥玻璃棒
;⑥1100分光光度计;⑦电子天平;⑧水浴锅。

取3支试管,做好标记,按下表操作:
加入物(ml) B(空白) S(标准) U(待测)
小牛血清(1:10) - -
蛋白质标准液(1:10) - -
%Nacl - -
双缩脲试剂
,观察各试管颜色;
℃水浴锅中加热20min,观察颜色;
,置于1100分光光度计的样品槽内,在波长540nm,以空白管调零,测S和U管吸的光度;
,将比色杯中的样品回收进试管。
依据公式算出结果:
四、结果与讨论:
:
①选取三支洁净无损的试管,%氯化钠溶液、蛋白质标准液、,分别命名为B试管、S试管和U试管,再分别向三支试管内加入4ml的双缩脲试剂,溶液均成蓝色透明状。
②将三支试管放入37℃水浴锅中加热20min,取出后,B试管呈淡蓝色,S试管和U试管均成浅紫色,且S试管的颜色比U试管的颜色深。(如图一)

图一水浴后三支试管颜色图二分光计读数
测定次数

1 2 3
平均吸光度
管号
管号
S
U
结果计算:代入公式:血清总蛋白(g/L)=(Au/As)X蛋白质标准液浓度(g/L),得出结果:血清总蛋白=。

经查阅资料得:正常成人血清总蛋白含量为60~80g/L,而小牛血清总蛋白含量比正常成人血清总蛋白含量略低一点,,符合情况。
:
①本次试验的试剂混合水浴后出现了预期效果:B试管呈淡蓝色,S试管和U