精品论文-法医昆虫种属鉴定的分子生物学方法研究.pdf

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二0 年月
法医昆虫种属鉴定的分子生物学方法研究微卫星遗传标记直接进行分型检测。对于线研究生应斌武导师侯一平教授四川大学华西基础医学与法医学院成都【摘要】目的本课题旨在探索新的法医昆虫学种属鉴定方法。方法利用引物设计软件分别对法医常见昆虫的常染色体微卫星区域和线粒体进行引物设计,使用际醴直对其进行扩增,用聚丙烯酰胺电泳对锓掷搿⒁尽6杂粒体ü痉掷搿⒓觳猓肈测序仪进行测序分析。<コ娴亲缘关系分析。结果采用对线粒体蚪蠵扩增和庑虻姆椒ǎ颐堑玫搅酥泄个地区植煌ㄒ匠<网川大学博士学位论文
近缘关系。结论基于不同的遗传标记,我们建立了两种用于法医虫的该基因测序结果。通过分子进化关系分析,我们得到了他们之间的亲缘关系图。对于微卫星遗传标记,我们发现了具有舍蝇种属特异的微卫星,并通过分子进化关系分析了三个地区舍蝇的昆虫学种属鉴定的体系。比较了两种遗传标记对法医常见嗜尸性苍蝇种属鉴定的特点,提示两种遗传标记可以用于法医常见昆虫的种属鉴定,为法医鉴别嗜尸性蝇类种屑的提供了可供选择的新方法。【关键词】法医昆虫学,中停⑽佬牵吡L錎,嗜尸性苍蝇。种属鉴定四川入学博士学位论文应斌武
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分子生物学方法在法医昆虫学中的应用研究前言机体死后不同阶段,到达尸体上的嗜尸性苍蝇种类不同,呈现出较强的演替规律。在法医学领域,这一规律已被广泛地应用于死后经过时间和死亡现场的推断方面。法医实践中,嗜尸性蝇类种属鉴定是最重要的一步,常常对案件的侦破起到关键作用。传统上,仅依据蝇类形态学特征来判断种属。由于蝇类的形态结构复杂和种间形态差异微小等特点,尤其是对蝇类幼虫和卵,其种属很难鉴别。而利用分子生物学的方法对嗜尸性蝇类及其幼虫进行种属鉴定,是近几年来国外研究的热点之一。该检测方法能有效地将嗜尸性蝇类鉴定到种属的水平,将成为法医鉴别嗜尸性蝇类种属的可靠依据,有助于法医对死亡时间和死亡现场的正确分析,进而对死因不明的案件进行准确的定性。作为遗传物质的币彩巧锝返闹匾<锹颊撸谘究生物的进化历程,确定物种问的进化关系等方面,蛄芯有易于分析,含有丰富的进化信息和易于获取等优点。对于研究种间及种内进化关系和遗传多样性来说,快速进化的线粒体有效的分子标记。线粒体5ケ缎停拗刈椋誓赶狄糯āS于受选择的压力小,其进化的速度较核一倍,故线粒体晌O低骋糯Ю硐氲姆肿颖昙恰目前法医实践中已经对许多昆虫的核糖体跋吡博士擎缸轮奠四川大学应斌武
型,可为法医昆虫种属鉴定提供高信息基因座。体进行了序列测定。经常使用的基因有细胞色素氧化辅酶,细胞色素氧化辅酶,琋,吡L灞嗦和琁核编码H缃瘢嘀掷コ鎚的大部分序列已经被测序,.//J仁苍蝇是法医昆虫学中重要的昆虫,因此现在的大多数法医昆虫学家都把目光聚集在双翅目昆虫上,在这些研究中使用的最多的基因是细胞色素氧化辅酶,细胞色素氧化辅酶。微卫星序列是由个碱基对作为核心单位,串联重复形成的一类蛄校淦慰刹捎肞技术扩增。微卫星主要由于核心重复单位数目的变化形成了基因座的遗传多态性,其等位基因可用银染、荧光标记和放射显影等技术分微卫星遗传标记具有如下特点:诜ㄒ匠<コ婊蜃中分布广泛。蚱我话阈∮,易于扩增。测的灵敏度比小卫星基因座高十倍,适用于昆虫微量检材的鉴定。晃⑽佬且糯ū昙堑牟煌任换蛑淦纬ざ炔别不大,优势扩增不明显。治龇椒ḿ虮恪⑴行妥既罚中程序明确规范,分型结果图形简单,有利于实现中偷谋曜化和自动化,有利于分型结果的计算机储存和交换。因此微卫星遗传标记正逐渐应用于昆虫学种属鉴定。本课题目的是建立适用于法医常见嗜尸性苍蝇种属鉴定的分子生物学方法。四川大学博士学位论文应斌武
第一部分嗜尸性苍蝇的治龅姆椒ㄑС跆近年来,以;〉姆肿由镅Ъ际跽鸾サ卦擞糜诜医昆虫学领域““5泄乇ǖ朗仁圆杂珼分析技术的文献相对较少。本部分着重昆虫崛》椒特别是法医昆虫中的蛹、幼虫等扩增条件、线粒体基因的初选等方法探索,ü喔霾煌厍∪种不同种类的嗜尸性苍蝇成虫个体、蛹、幼虫等各两例。不同种类嗜尸性苍蝇的形态学照片如图尽博士学位论文图拇ǹF蘸谟图憬抗饴逃四川大学应斌武
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