2细胞化学染色-（精选）.ppt

临床血液学和血液学检验第四章造血检验的基本方法
华中科技大学同济医学院医学检验系
陈万新
第二节细胞化学染色
细胞化学(或组织化学)是在细胞形态学的基础上运用无机化学、有机化学或生物化学等技术研究细胞在发育、增殖分化过程中的主要化学成分的定位、定量及代谢功能状态的学科,是细胞形态学的重要组成部分。
细胞化学染色一般包括固定、显示、复染等步骤。
主要用于:
显示细胞或组织的酶、蛋白质、糖类、脂类、无机盐(如铁)等化学成分的含量及分布状况;
研究细胞组织来源及分化程度;为疾病的诊断、鉴别诊断及治疗提供重要的依据。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP)
㈠.原理:
方法一(偶氮偶联法):~,细胞中的碱性磷酸酶能将底物磷酸萘酚钠水解,生成a-萘酚和磷酸钠,再以稳定的重氮盐与萘酚偶联生成不溶性有色偶氮染料沉淀,定位于细胞浆中。
试剂:
:1∶9福尔马林乙醇液,即40%甲醛溶液(福尔马林)10ml加无水乙醇90ml混合即得。
-磷酸萘酚钠溶液:100mg a-(~)Tris缓冲溶液中,混匀后4℃保存。
( mol/L ):Tris粉(三羟甲基氨基甲烷),()。
(临用时现配):取a-,,混匀即可。
染色步骤:
1、干燥涂片(观察片及阳性对照片),滴加固定剂布满血膜固定5秒钟,流水冲洗,待干或滤纸吸干。
2、滴加作用液室温下(或37oC)染色15~20分钟,流水冲洗,待干。
3、中性红溶液复染3分钟,流水冲洗,干后鏡检。
结果判断:
阳性反应呈蓝黑色颗粒状,定位于细胞浆中。
计数方法:
按碱性磷酸酶活性强弱,分为5级(0-IV或0-++++) 。
0级 0 胞浆呈原色,无颗粒。
Ⅰ级+ 胞浆呈浅灰色,阳性颗粒占胞浆的25%-50%。
Ⅱ级++ 阳性颗粒约占胞浆面积的50%-75%。
III级+++ 阳性颗粒占胞浆面积的75%-100%。
Ⅳ级++++ 胞浆充满蓝黑色致密的阳性颗粒,占胞浆面积的l00%,甚至遮盖胞核。
每例的血片,均计数100个中性粒细胞(杆状核及分叶核粒细胞),求出NAP阳性细胞的百分比(阳性率),并按酶活性的强弱不同,求得阳性指数(积分)。
0级 0 胞浆呈原色,无颗粒。
Ⅰ级+ 胞浆呈浅灰色,细小蓝黑色颗粒占胞浆面积的25%~50%。
Ⅰ级+ 胞浆呈浅灰色,细小蓝黑色颗粒占胞浆面积的25%~50%。
Ⅱ级++ 胞浆呈棕色片状沉淀,小到中等颗粒约占胞浆面积的50%~75%。
Ⅱ级++ 胞浆呈棕色片状沉淀,小到中等颗粒约占胞浆面积的50%-75%。
Ⅲ级+++ 胞浆充满棕黑色沉淀,分布均匀,中到大颗粒占胞浆面积的75%-100%。
Ⅲ级+++ 胞浆充满棕黑色沉淀,分布均匀,中到大颗粒占胞浆面积的75%-100%。
Ⅳ级++++ 胞浆充满深黑色致密的团块状沉淀,甚至遮盖胞核,中到大颗粒占胞浆面积的l00%。