环境工程微生物学试验试验一微生物细胞数的计数.ppt

环境工程微生物学实验实验四: 滤膜法测定总大肠菌群
适用范围:环境工程专业
实验教师:李宁顾彦
一、主题内容与适用范围
本方法规定了生活饮用水中总大肠菌群的滤膜测定方法。
本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中总大肠菌群数的测定。
总大肠菌群
总大肠菌群:指那些能在37℃、24h内发酵乳糖产酸产气的、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
主要包括埃希氏菌属、产气肠杆菌属、枸橼酸盐杆菌属、副大肠杆菌属等细菌。
生活饮用水卫生标准GB5749-2006
二、基本原理
一、测定意义:
二、总大肠菌群的特征
在37℃、24h内发酵乳糖产酸产气
革兰氏阴性无芽孢杆菌。
在特殊培养基上能够长处具有典型特征的菌落
三、测定方法
多管发酵法
滤膜法
二、基本原理
,细菌被截留在滤膜上,将滤膜贴在选择性培养基上,经培养后,计数生长在滤膜上的典型大肠菌群菌落数。
培养基及主要仪器:
品红亚硫酸钠培养基
乳糖蛋白胨培养基
滤器
滤膜
抽滤设备
显微镜
平皿
二、基本原理
三、培养基与试剂
品红亚硫酸钠培养基
成份
A 蛋白胨 10g
B 酵母浸膏 5g
C 牛肉膏 5g
D 乳糖 10g
E 琼脂 15~20g
F 磷酸氢二钾
G 无水亚硫酸钠 5g左右
H 碱性品红乙醇溶液(50g/L) 20mL
I 蒸馏水 1000mL
储存培养基的制备
先将琼脂加到500mL蒸馏水中,煮沸溶解,于另500mL蒸馏水中加入硫酸氢二钾、蛋白胨、酵母浸膏和牛肉膏,加热溶解,倒入已溶解的琼脂,补充蒸馏水至1000mL,~,再加入乳糖,分装,115℃高压灭菌20min,储存于冷暗处备用。
三、培养基与试剂
品红亚硫酸钠培养基
平皿培养基的配制
将上法制备的储存培养基加热融化,用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶液置于灭菌空试管中,再按比例称取所需的无水硫酸钠置于另一灭菌试管中,加灭菌水少许,使其溶解后,置沸水浴中煮沸10min以灭菌。
用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液,滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色退成淡粉色为止,将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加到已融化的储存培养基内,并充分混匀(防止产生气泡),立即将此种培养基15mL倾入已灭菌的空平皿中。待冷却凝固后置冰箱内备用。此种以制成的培养基于冰箱内保存不宜超过二周。如培养基已由淡粉色变为深红色,则不能再用。
三、培养基与试剂
乳糖蛋白胨培养基
成份
A 蛋白胨 10g
B 牛肉膏 3g
C 乳糖 5g
D 氯化钠 5g
E 溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L) 1mL
F 蒸馏水 1000mL
制法
将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中,~,%溴甲酚紫乙醇溶液,充分混匀,分装于装有倒管的试管中,115℃高压灭菌20min,贮存于冷暗处备用。
四、仪器
滤器。
滤膜,~。直径根据滤器规格,。
抽滤设备。
无齿镊子。
培养箱: 36±1℃。
冰箱: 0~4℃。
天平。
显微镜。
平皿: 直径为9cm。
灭菌刻度吸管: 1mL,10mL。