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HPLC同时测定余甘子叶中槲皮素和山奈酚的含量
[摘要] 目的建立HPLC同时测定余甘子叶中槲皮素和山奈酚含量的方法。方法色谱柱:Thermo Hypersil BDS C18( mm×250 mm,5 μm),梯度洗脱流动相:乙腈-%磷酸溶液,流速: ml/min,检测波长:370 nm,柱温:30℃,进样体积:20 μl。~ μg/μl(r=)、~ μg/μl(r=)范围内呈良好的线性关系,平均回收率(n=6)%(RSD=%)、%(RSD=%)。结论建立了同时测定槲皮素和山奈酚含量的方法,可进一步完善余甘子叶的质量控制体系。
[关键词] HPLC;余甘子叶;槲皮素;山奈酚
[中图分类号] R282 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2014)07(a)-0050-03
余甘子(Phyllanthus emblica L.)是大戟科(Euphorbiaceae)叶下珠属(Phyllanthus)植物,是一味重要的传统民族药,已被载入多版中国药典[1]。余甘子不仅果实可入药,其种子、根、茎、叶、花亦可入药,如叶用于治疗水肿、皮肤湿疹、蛇咬伤、蜈蚣咬伤等[2-3]。随着药理学研究的展开,余甘子在抗菌[4]、抗肿瘤[5]、抗氧化[6]、抗动脉粥样硬化[7-8]、抗乙型肝炎病毒[9]、保肝[10]、增强免疫[11-12]等方面的作用得到了进一步的认识。余甘子有多种化学成分,其中槲皮素和山奈酚为余甘子叶的活性成分[13],本研究建立同时测定余甘子叶中槲皮素和山奈酚含量的方法,以期为进一步完善余甘子叶的质量控制体系提供依据。
1 仪器与试剂
仪器
高效液相色谱仪:型号Agilent1100(含在线真空脱气机、高压四元梯度泵、标准自动进样器、智能化柱温箱、可变波长检测器、二极管阵列检测器);Series色谱工作站(美国安捷伦科技公司);SB3200T超声波清洗仪(上海能信超声有限公司);LG16-W高速微量离心机(美(德国赛多利斯);Millipore Simplicity-185超纯水器(美国密理博公司)。
试剂
槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:100081-200406);山奈酚对照品(中国药品生物制品检定所,批号:11081-200405)。余甘子叶样品经广西中医学院药用植物教研室刘寿养副教授鉴定。乙腈为色谱纯,水为高纯水,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
实验条件的设定
色谱柱:Thermo Hypersil BDS C18柱( mm×250 mm,5 μm),流速: ml/min,检测波长:370 nm,柱温:30℃,进样量:20 μl/次,梯度洗脱流动相:乙腈-%磷酸溶液,梯度洗脱程序见表1。理论塔板数以槲皮素和山奈酚峰计算应≥3000,分离度应>,在此色谱条件下,样品分离良好,结果见图1。
表1 梯度洗脱时间程序表
图1 余甘子叶的HPLC色谱图
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标准对照品溶液的制备