血清生化物质测定步骤.doc

一、原理:葡萄糖为一含醛基的己糖,在酸性与加热情况下脱水反应生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛,再与邻甲苯胺缩合成芳香族第一级胺青色的席弗氏碱。二、试剂:1、邻甲苯胺试剂:取冰醋酸920ml,加入硫脲(Thiourea),待其溶解,加邻甲苯胺(o-Toluidine)80ml,充分混合后,取此液960ml加入饱和硼酸溶液40ml,混匀,放置于棕色瓶中。2、饱和硼酸溶液:称取硼酸6g,以蒸馏水溶解并稀释至100ml,放置一夜,过滤即可应用。3、葡萄糖贮存标准液(1ml=5mg):将少量无水葡萄糖,CP置于硫酸干燥器内一夜。精确称取此葡萄糖500mg,以饱和苯甲酸溶液溶解并转移入100ml容量瓶内,以饱和苯甲酸溶液加至刻度。此液可长期保存。4、葡萄糖应用标准液(1ml=):取葡萄糖贮存标准液1ml置于100ml容量瓶内,加入饱和苯甲酸溶液至刻度。5、饱和苯甲酸溶液:称取苯甲酸(Benzoicacid),于800ml蒸馏水中,加热溶解,冷却后加蒸馏水至1000ml。三、操作:步骤管别测定管标准管空白管血清(ml)(ml)(ml)(ml),冷水冷却,用640nm或红色滤光板光电比色,用蒸馏水作空白,记录各读数。计算:(测定-空白)/(标准-空白)**100/=葡萄糖毫克%血清白蛋白测定(酚试剂法)原理:用硫酸钠将血清中球蛋白沉淀,所分离的白蛋白加酚试剂而呈蓝色,与含酪氨酸的标准管比色,求得白蛋白量。血清总蛋白减去白蛋白即为球蛋白量。白蛋白与球蛋白分离:球蛋白与白蛋白不同,具有易溶于稀盐溶液而不溶于浓盐溶液的特点。故以23%硫酸钠或21%亚硫酸钠溶液沉淀球蛋白。再利用乙醚将白蛋白与球蛋白分离。试剂:酪氨酸标准液(1ml=):精确称取酪氨酸(Tyrosine),置于1000ml容量瓶中,。2、:%,:取XL的上述浓盐酸,因为盐酸是1-1价的离子组成的酸,当量浓度等于MOL浓度,据配制前后溶质的MOL数相等,则有如下计算:(X*)/=1,X=,%硫酸钠溶液:称取无水硫酸钠230g,加蒸馏水至1000ml。加热溶解,冷却后补足蒸馏水量。酚试剂:钨酸钠(NaWO4·2H2O)100g钼酸钠(NaMO4·2H2O)25g蒸馏水700ml置于2000ml烧瓶内,再加入85%磷酸(H3PO4)50ml,浓盐酸(HCl)100ml。应用回流冷凝器煮沸10小时(烧瓶内可加入小玻璃珠10数颗,以防煮沸时溶液冲入冷凝管而溢出)。除去冷凝管后,再加入硫酸锂150g,蒸馏水50ml,溴液(或30%过氧化氢)数滴,继续煮沸15分钟,以除去多余的溴(或过氧化氢)。因溴刺激性大,应在排气柜内进行。制成的酚试剂为鲜明黄色,保存于棕色瓶内备用。5、10%氢氧化钠溶液:取氢氧化钠100g,加100ml蒸馏水至1000ml。三、操作:步骤如下:(1)取边缘完整的试管一支,;(2)加入23%,混匀;(3)吸取