大鼠胆固醇(CH)试剂盒使用说明书--上海谷研生物公司专业代理销售本试剂盒仅供研究使用。检测范围:-45nmol/L使用目的:96T本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中胆固醇(CH)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠胆固醇(CH)水平。用纯化的大鼠胆固醇(CH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胆固醇(CH),再与HRP标记的胆固醇(CH)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胆固醇(CH)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠胆固醇(CH)浓度。试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品(64nmol/L) ×1瓶3 酶标包被板4 样品稀释液5 显色剂A液6 显色剂B液标本要求12孔×8条6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶9 标准品稀释液10 说明书11 封板膜12 密封袋×,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。32nmol/L16nmol/L8nmol/L4nmol/L2nmol/L5号标准品4号标准品3号标准品2号标准品1号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃. 终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总
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