酵母核糖核酸的分离及组分鉴定一、实验目的了解核酸的组分,并掌握鉴定核酸组分的方法二、实验原理酵母核酸中RNA含量较多,在细胞中除了核酸外还有蛋白质、多糖及其他多种化合物RNA可溶于碱性溶液,在碱性提取液中加入酸性乙醇溶液可以使RNA析出RNA是由核糖、嘌呤/嘧啶碱和磷酸组成的,在提取的RNA中加硫酸煮沸即可得到这些组分的混合溶液——可对它们分别进行定性鉴定,以证明提取物是否为核酸磷酸的鉴定:磷酸与定磷试剂(钼酸铵)作用产生蓝色的磷钼酸铵沉淀核糖的鉴定:核糖与苔黑酚试剂反应呈绿色嘌呤碱的鉴定:嘌呤碱与硝酸银作用产生白色的嘌呤银沉淀脱氧核糖的鉴定:常用的方法是二苯胺法脱氧核糖+二苯胺试剂蓝色化合物100℃三、实验器材乳钵水浴锅滴管烧杯锥形瓶量筒锥形瓶离心机离心管四、%/L硝酸银溶液三氯化铁浓盐酸溶液苔黑酚乙醇溶液定磷试剂五、,并在乳钵中研磨均匀将悬浮液转移至100mL锥形瓶中,在沸水浴中加热30min,冷却将悬浮液转入离心管中,3000rpm离心15min,将上清转移至新离心管中,缓慢加入10mL酸性乙醇溶液待核糖核酸沉淀完全后,3000rpm离心3min,弃上清用10mL95%乙醇洗涤沉淀2次(2000rpm,2min),10mL乙醚洗涤沉淀1次后,用10mL乙醚转移沉淀至布氏漏斗中,抽滤沉淀在空气中干燥,得到酵母核糖核酸核糖核酸组分的鉴定称取200mg提取的核酸,,在沸水浴中加热10min,制成水解液嘌呤碱的鉴定:取1支试管,在1mL水解液加入过量的浓氨水,,观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀核糖的鉴定:取1支试管,加入1mL水解液、,置沸水浴中10min,观察溶液是否变成绿色磷酸的鉴定:取1支试管,加入1mL水解液和1mL定磷试剂,在水浴中加热,观察溶液是否变成蓝色六、实验思考如何得到高产量的RNA粗制品?本实验RNA的组分有哪些?如何鉴定?
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