化学反应的限度化学平衡.ppt

第十一章荧光分析法分子荧光、磷光分析法的基本原理介绍荧光磷光光谱的产生、主要影响因素、荧光强度与被测物质之间的关系荧光分析仪器分子荧光定量分析简介化学发光第一节荧光分析的基本原理一、分子发光分析法及其分类某些物质的分子吸收一定能量后,电子从基态跃迁到激发态,以光辐射的形式从激发态回到基态,这种现象称为分子发光,在此基础上建立起来的分析方法为分子发光分析法较高激发态基态吸收能量受激光辐射退激分子在退激过程中以光辐射形式释放能量根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类:光致发光:以光源来激发而发光电致发光:以电能来激发而发光—原子发射光谱法生物发光:以生物体释放的能量激发而发光化学发光:以化学反应能激发而发光—化学发光分析法荧光—荧光分析法磷光—磷光分析法二、(提高激发光强度,可提高荧光强度采用高灵敏度的检测系统可大大提高灵敏度,检测限荧光分析法比分光光度法低2~,选择不同的激发光波长不同的物质发射的荧光不同,选择不同的检测荧光波长比较容易排除其它物质的干扰,;仪器价格适中;测定范围较广具发光强度可定量测定许多痕量的无机物和有机物,广泛应用在生物化学、分子生物学、免疫学及农牧产品分析、卫生检疫等领域。荧光法比磷光法应用广泛,不如分光光度法荧光和磷光光谱法一、荧光和磷光光谱的产生具有不饱和基团的基态分子光照后,价电子跃迁产生荧光和磷光基态分子价电子跃迁到激发态光照激发去激发光**n基态在光致激发和去激发光的过程中,分子中的价电子(、n电子)处于不同的自旋状态,,基态分子每一个轨道中两个电子自旋方向总是相反的,处于基态单重态。用“S0”表示;当物质受光照射时,基态分子吸收光能产生电子能级跃迁,由基态跃迁至更高的单重态,电子自旋方向没有改变,净自旋=,S1,S2,S3分别代表基态,第一,二,三激发单重态单重态分子具有抗磁性,激发态的平均寿命约为10-8若分子中电子跃迁过程中伴随着自旋方向的改变,由基态单重态→激发三重态,净自旋0。这种跃迁为禁阻跃迁T1、T2、T3分别表示第一、二、三激发三重态基态单重态S0第一激发三重态T1自旋平行三重态分子具有顺磁性,激发态的平均寿命约为10-4~1S分子中电子受激跃迁到激发态后,处于激发态的分子是不稳定的,去激返回到较低激发态或基态时有两种方式:——不伴随发光现象的过程叫无辐射去激,体系内的多余的能量以热的形式释放。包括:内部转换(IC)—相同的多重态之间的转换S-S系间窜跃(ISC)—不同的多重态之间的转换S-T振动驰豫(VR)—同一电子能级中,从较高振动能级到较低振动能级的过程外部转移—指激发态分子与溶剂分子或溶质分子的相互作用及能量转移,使荧光或磷光强度减弱或消灭发生系间窜跃电子需转向,S1—T1间进行,比内部转换困难