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发光柱子材料化学发光免疫测定技术化学发光免疫测定是免疫测定技术继酶免技术、放免技术、荧光免疫技术和时间分辨荧光免疫技术之后发展的一项新兴测定技术。要谈化学发光免疫测定技术就必须先谈化学发光。化学发光技术是近二、三十年来发展起来的一种测定方式,其利用化学反应释放的自由能激发中间体(常用碱性磷酸酶-金刚烷胺),使其从激发态回到基态,当中间体从激发态回到基态时会释放等能级的光子,对光子进行测定而进行定量分析。化学发光具有荧光的特异性,同时不需要激发光,就避免了荧光分析中激发光杂散光的影响有很高的灵敏度,并且不象放射分析那样存在强烈的环境污染和健康危害,是一种非常优秀的定量分析方法。虽然化学发光具备很高的特异性和很小的干扰,但化学分析本身的不特异性,制约了整个方法的使用。因此,如同RIA、FIA等一样利用免疫反应的特异性和化学发光本身的信号特异性形成了目前所说的化学发光免疫测定技术。 CLIA是一种高度敏感的微量测定技术,凡具有抗原性的物质都可以用CLIA测定。其起步于80年代初,快速发展于90年代,在国外CLIA的应用处于蓬勃发展的阶段,其具备以下特点①高度敏感,极限达10-17-10-19M/L,远高于RIA、EIA,与TRFIA相当但比TRFIA便宜。②特异性强,重复性好<5%。③测定范围宽,可达7个数量级。④试剂稳定性好,无污染有效期6-12月。⑤操作简单,易于自动化。在对环保很重视的国家,CLIA成了取代RIA的首选方法。电化学发光分析技术特点最先进的分析原理专利的电化学发光分析技术。ECL是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应。包括了两个过程。发光底物二价的三联吡啶钌及反应参与物三丙胺在电极表面失去电子而被氧化。氧化的三丙胺失去一个H成为强还原剂,将氧化型的三价钌还原成激发态的二价钌,随即释放光子恢复为基态的发光底物。最好的发光标记物-三联吡啶钌分子量小,结构简单。可以标记于抗原,抗体,核酸等各种分子量,分子结构的物质。从而具有最齐全的检测菜单。三联吡啶钌为水溶性,且高度稳定的小分子物质。保证电化学发光反应的高效和稳定,而且避免了本底噪声干扰。最先进的包被技术采用罗氏公司专利的链霉亲和素-生物素包被技术。链霉亲和素-生物素是最牢固和特异的结合。保证了牢固的包被效果和特异的检测结果。特殊的磁性微粒子载体以及磁性分离技术由聚苯乙烯包被的磁性微粒子为载体,直径仅为。同类型产品最小; 提供类均相的反应环境,增加反应面积,提高反应速度; 保证最终检测结果的高灵敏度; 利用磁性分离技术,实现全自动化分析; 与其它几种标记免疫测定技术相比,电化学发光具有以下的优点: ,检测下限达1pmol; ,达7个数量级; ,出第一个结果的时间仅需数分钟; ,可以同样的灵敏度和线性范围检测各种物质,包括DNA; ,无污染和衰变问题; 。――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――概述化学发光免疫分析是将化学发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。这种方法不仅具有化学发光分析的高灵敏度和抗原抗体反应的高度特异性,而且还具有分离简便特点,可以实现自动化分析,使之成为医学、生物学研究领域中一种新的重要的免疫学分析手段。发光与化学发光剂 1〃发光一种物质由电子激发态回复到基态时,释放出的能量表现为光的发射,称为发光(luminescence)。根据形成激发态分子的激发能可将发光分为三种类型:光照发光、生物发光和化学发光。 1光照发光(photoluminescence)发光剂经短波长入射光照射后进入激发态,当回复至基态时发出较长波长的可见光。 2)生物发光(bioluminescence)典型例子为萤火虫发光。反应底物为萤火虫荧光素(fireflyluciferin),在荧光素酶(luciferase)的催化下利用ATP产能,生成激发态的氧化荧光素(oxyluciferin),后者在回复到基态时多余的能量以光子形式放出3)化学发光(Chemiluminescence)在常温下经化学反应所产生的发射光。化学发光是一个多步骤的过程,其机制为某些化合物(发光剂或发光底物)可以利用一个化学反应产生的能量使其产物分子或反应中间态分子上升至电子激发态。当此产物分子或中间态分子衰退至基态时,以发射光子的形式释放能量(即发光)。2〃化学发光剂发光剂是指在发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物,根据上述发光特点可将发光剂分为荧光素、生物发光剂和化学发光剂三种。下面主要叙述化学发光免疫技术中常用的化学发光剂或发光底物。 1)酶促反应的发光底物是指经酶的降解作用而发出光的一类发光底物,目前化学发光酶免疫技术中常用