大黄鉴定实验报告(共7篇).docx

大黄鉴定实验报告(共7篇) 大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的熟悉蒽醌类成分的提取分离方法掌握pH梯度提取法的原理和操作技术学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂:大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。仪器:500mL圆底烧瓶、球形冷凝管、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要成分为为蒽醌化合物,含量约为3%~5%,大部分与葡萄糖结合苷,游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。其中,大黄酸具有羧基,酸性最强;大黄素具有β-酚羟基,酸性第二;芦荟大黄素连有羟甲基,酸性第三;大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异,可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。大黄酸R1=HR2=COOH 大黄素R1=CH3R2=OH 芦荟大黄素R1=CH2OHR2=H 大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3 大黄酚R1=CH3R2=H 四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g 20%H2 SO4150ml 加热1h,抽滤、干燥滤饼 150ml乙醚回流提取1h 乙醚层水层乙醚层 HCl3 大黄酸沉淀水层乙醚层 HCl%NaOH 大黄素沉淀芦荟大黄素、大黄素甲醚沉淀具体操作步骤 :称取大黄粗粉10g,加20%H2SO4水溶液150mL,在水浴上加热1小时,放冷,抽滤,滤饼用NaOH溶液洗至近中性,于70℃干燥后,研碎,置250mL圆底烧瓶中,加入乙醚150mL回流提取1小时,得到乙醚提取液。蒽醌类成分的提取:乙醚提取液经薄层层析检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。薄层板为硅胶—CMC粘合板,展开剂为石油醚:乙酸乙酯近水平或直立展开,在可见光下,可看到四个斑点。其中最上面黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚的混合物,在此条件下,不能分开,其余3个斑点依Rf值的顺序是大黄素、芦荟大黄素、大黄酸,记录图谱并计算Rf值。 ,以35mL5%NaHCO3水溶液萃取三次,乙醚层经薄层层析检查,指示已提尽大黄酸后,合并三次NaHCO3萃取液,用浓盐酸酸化至PH2-3左右,析出大黄酸沉淀。。抽滤后,刮下颗粒并称重。经5%NaHCO3水溶液萃取后的乙醚层,继以35mL5%Na2CO3水溶液萃取三次,乙醚层经薄层检查,指示已提尽大黄素后,合并三次Na2CO3萃取液,用浓盐酸酸化至PH2-3左右,析出大黄素沉淀。。抽滤后,刮下颗粒并称重。经5%Na2CO3水溶液萃取过后乙醚层以35mL%NaOH水溶液萃取四次,乙醚层经薄层检查,指示已提尽后,合并三次NaOH萃取液,用浓盐酸酸化至PH2-3左右,析出芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚沉淀混合物。。抽滤后,刮下颗粒并称重。 (1)碱液试验分别取各蒽醌结晶数毫克置于样品管中,加2%氢氧化钠溶液1ml,观察颜色变化。凡有互为邻位或对位羟基的蒽醌呈蓝紫至蓝色,其它羟基蒽醌呈红色。五、注意事项: 游离蒽醌的提取要控制温度,回流不宜太剧烈。 pH梯度萃取分离时,以保证提取充分,可以用薄层色谱作监测。注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。六、数据记录、结果讨论与分析: 分别取各上述沉淀数毫克置于样品管中,加2%氢氧化钠溶液1ml后,观察到各样品管中溶液均呈红色、但第1根管中颜色略淡。七、思考题 1、简述大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的酸性与结构的关系。答: A大黄酸R1=HR2=COOH B大黄素R1=CH3R2=OH C芦荟大黄素R1=CH2OHR2=H D大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH 3 E大黄酚R1=CH3 R2=H 酸性:A>B>C>E≈D 梯度萃取法的原理是什么?如何利用该方法分离大黄中的5种游离羟基蒽醌化合物? 答:pH梯度萃取法的原理是由于溶剂系统pH变化而改变了它们的存在状态,从而改变了他们在溶剂系统中的分配系数。由于各羟基蒽醌结构上的不同所表现的酸性不同,用pH梯度萃取法分离他们;大黄酚和大黄素甲醚酸性相近,利用其极性的差异,用柱色谱分离之。 ,思考设计实验方案所需因素? 答:游离蒽醌的提取要控制温度,回流不宜太剧烈。要注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。八、参考文献吴立军主编,《天然药物化学实验指导》北京;人民卫生出版社,XX 康廷国主编,《中成药薄层色谱鉴别》.北京:人民出版社,1995 徐选明,刘新大黄中大黄素提取工艺的