抗菌肽天蚕素A截短肽的高效表达、分离纯化及抗体制备.pdf

着抗菌肽及转基因技术在理论和应用上更深入的研究,抗菌肽最终必将对人类医学产生深远影响。目的通过将天蚕素������珻�截短肽的串连融合表达,降低其对工程菌的毒性和提高其表达产量,为其产业化提供可能的方法。比较�其两个�韭菪��虻幕钚允欠褚谎��礁�【螺旋和一个�韭�旋的抑菌活性是否有区别,从而为改造已有抗菌肽和设计新抗菌肽分子提高活性的途径,提供理论依据。通过了解�的抗原性区域,制备高质量抗体,为以后更好的检测抗菌肽�在异源表达系统中的表达情况及表达产量提供帮助。方法�J褂玫鞍字首ḿ曳治鱿低����,��://��甧���畂�/���������程序分析�序列的二级结构,������程序分析其功能位点。根据二级结构和功能位点分析,选取氨基酸区域���作为��,��一�作为��,�������ü鼼��幼魑����菝苈胱拥钠ò�陨杓坪铣�对反向互补的核苷酸单链,并在每条单链的��思由螦�尾。将�院塑账岬チ捶直鹆姿峄�笸嘶�延伸。用连接酶将这�院塑账崴�创��2煌�奖词�拇��搴蠊����靥澹�H氪蟪Ω司鶧���锌寺。�婊�粞【��经��笥们碇�羌�ā�建于�������重庆医科大学硕士研究生学位论文
ḿ�ㄑ粜灾柿WH氪蟪Ω司鶥�����.进行串连融合表达,并优化诱导表达条件。选择优化后的诱导条件进行诱导表达,用��泶锊�镉们缀筒阄鼋�浯炕�螅�诤系鞍子肅��懈畛傻�体,通过复性、冷冻干燥浓缩等步骤,分离、纯化和浓缩抗菌肽,用��么蟪Ω司�⒁豕党Ω司�⒎窝卓死撞��⑼�碳俚グ��⒔�黄色葡萄球菌检测其抗菌活性。用微量稀释法检测其最小抑菌浓度。��ú糠执炕�娜诤系鞍酌庖連��疌小鼠,分别在第三、四次免疫一周后断尾取血,���觳馄湫Ъ邸��������ㄆ涮匾煨浴�结果用后,成功构建了��个拷贝的串连体。琼脂糖电泳分析分别在其相应分子量的位置有特异性条带。转化入大肠杆菌����������瓹����、����、�质粒经菌落���ā⑶碇��电泳分析正确后测序,其插入位置和序列完全正确,成功构建了�各截短肽的串连融合表达载体。��诤系鞍證����、�����������、��浓度为����、诱导时机为第�加入、诱导�后得到稳定的表达量,其中��.�����和����的表达量最高,分别为�.�ァ���%和�.�ァH诤系鞍拙璖�—��分析,证实其大小一致,����産��鉴定有特异性条带。��甈��治觯琖���.��鉴定。��甈���ǹ咕�牡拇慷群托灾省���獵��������的互补���淳璂�连接酶作����重庆医科大学硕士研究生学位论文�
缀筒阄龃炕�蟮闹刈榈鞍子肂����.�治銎浯慷染��处可见~条特异的目的条带。��志�笛橄允綜�鹘囟屉亩愿鞲锢际弦跣跃�囊志�芰η坑�革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌,抑菌活性从大到小为��������。此外,通过微量稀释法得出各�截短肽的最小抑菌浓度为���庖叩男∈罂寡G寰璄��检测,��、��、���谌�次免疫后的效价,分别为�����忧棵庖吆蟮男�价分别为�����豢寡G逵肳���.��鉴定可见特异性条带。而空载的诱导蛋白抗血清���蚖���.��检测结结论��晒�菇�嘶�谛蛄蟹治龅奶觳纤谹各截短肽串连融合表达载体,为其不易被原核细胞工程菌表达和表达量低的问题,提供了可能��ü�蕴觳纤氐男蛄蟹治觯�捎昧似淞礁鯭螺旋区分别表达和联合表达,其中含两个�菪�腃��的抑菌活性最强,而含�薗螺旋的��比含�薗螺旋的��抑菌活性强。可见抗菌肽的抑菌活性不只是和其�菪�母鍪�泄兀�购推渌�蛩兀�绲绾墒�褪�水性等有关。从而为改造已有抗菌肽和设计新型抗菌肽分子提供理论�%以上。经��切割获得单体,用������甈���ㄔ��果均为阴性。的解决途径。依据。��痬��。���/�。���:�重庆医科大学硕士研究生学位论文�
攵蕴觳纤匦蛄械牟煌��蛴没�蚬こ毯铣傻亩嚯拿庖叨�铮�了解天蚕素不同区域的抗原性,制备高质量抗体,从而为检测天蚕素�在异源表达系统中的表达提供了工具。关键词:抗菌肽,天蚕素����诤媳泶铮�蛄蟹治觯�志��性重庆医科大学硕士研究生学位论文�
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