荜茇中3种酰胺类生物碱在不同种属肝微粒体中代谢差异比较.doc

荜茇中3种酰胺类生物碱在不同种属肝微粒体中代谢差异比较-生物论文荜茇中3种酰胺类生物碱在不同种属肝微粒体中代谢差异比较 [摘要]胡椒碱、荜茇明宁碱和墙草碱是荜茇中主要的酰胺类成分,具有多种药理活性,为了阐明这3种成分在5个不同种属肝微粒体中代谢差异,应用超高效液相色谱串联双压线性离子阱静电场轨道阱质谱(UHPLCLTQOrbitrapMS)采集这3种化合物的全扫描图谱及二级三级质谱图,获取碎片离子信息,结合其质谱裂解规律和代谢产物精确质谱数据,比较3种生物碱分别在人、恒河猴、比格犬、大鼠以及小鼠肝微粒体中的代谢差异,并快速鉴定出3个胡椒碱代谢产物、2个荜茇明宁碱代谢产物及1个墙草碱代谢产物。结果显示荜茇中酰胺类生物碱的主要代谢类型为苯环亚甲二氧基开环脱甲基和氧化反应,且在种属间存在代谢率差异,该研究为进一步阐明荜茇中胡椒碱类成分体内代谢途径提供了实验依据。[关键词]荜茇;酰胺类生物碱;肝微粒体;超高效液相色谱双压线性离子阱静电场轨道阱质谱;,收载于2015年版《中国药典》。荜茇中富含以胡椒碱为主的酰胺类生物碱,具有多种药理活性。胡椒碱(piperine)具有抗氧化、抗炎等作用[12],荜茇明宁碱(piperlonguminine)具有神经保护及抑制SKNSH细胞amyloidβ形成的作用[34],墙草碱(pellitorine)具有血管保护等作用[5]。本课题组前期研究表明,荜茇总生物碱在多种诱导剂所致的帕金森病动物模型中具有一定的神经保护作用[68],而胡椒碱、荜茇明宁碱和墙草碱是荜茇总生物碱中3种主要成分,其结构类型均为具有酰胺键的胡椒碱类似物,见图1,目前对其在体外不同种属肝微粒体孵育体系的代谢差异与代谢产物研究未见报道。本文首次报道了采用超高效液相色谱串联双压线性离子阱静电场轨道阱质谱(UHPLCLTQOrbitrapMS),根据ESI电离模式下的质谱裂解规律,比较胡椒碱、荜茇明宁碱和墙草碱在不同种属肝微粒体中的代谢差异及其代谢类型,并鉴定了代谢产物。为进一步阐明荜茇总生物碱中主要成分的体内代谢行为及其体内生物效应提供了实验依据。 1材料双压线性离子阱静电场轨道阱质谱仪(LTQOrbitrapVelospro,ESI电离源,美国ThermoScientific公司);Ultimate3000超高效液相色谱仪(美国Dionex公司);高速冷冻离心机(美国ThermoScientific公司);恒温摇床(天津市欧诺仪器仪表有限公司)。胡椒碱、荜茇明宁碱和墙草碱均由本实验室分离得到,高效液相色谱法测其纯度均大于98%;βnicotinamideadeninedinucleotide2′phosphatereducedtetrasodiumsalthydrate(NADPH)购自Sigma(,MO,USA);·L-1PBS缓冲液购自北京索莱宝科技有限公司;水为超纯水,乙腈为色谱级,其余试剂均为分析纯。人、比格犬、SD大鼠、小鼠来源肝微粒体购自上海权阳贸易有限公司;恒河猴来源肝微粒体购自武汉普莱特生物医药技术有限公司。 2方法 (×150mm,);%甲酸水溶液