杀菌剂的毒力测定和.ppt

第三节杀菌剂的毒力测定和田间药效试验
一、毒力测定
杀菌剂对病菌的毒力是指药剂本身对病原菌直接作用的性质和程度,它是在严格控制条件下测定的,常用有效中量(ED50)表示,是指抑制50%病菌孢子萌发所需的剂量或有效中浓度(EC50)。
杀菌剂的毒力测定方法很多,长期采用经典的离体平板法,即以孢子萌发,抑制孢子发芽率或菌丝生长、变色、变形等指标作为毒力衡量的标准。
但近代随着新型内吸杀菌剂的发展,对杀菌剂的生物筛选逐渐由经典的离体筛选趋向活体筛选。
因为它不仅模拟田间实际,同时可以防止那些在离体平板上无效,而必须在植物活体上方显示活性的化合物漏筛。
但活体筛选涉及的因素较多,对寄主植物、试验条件要求较高,如光照、湿度、温度,为控制病原菌与寄主相互作用的条件,必须有适合的温室,费工耗资都较大。
离体测定能反映化合物毒力的本质和程度,方法简便,为研制新农药不可缺少,但它存在有一点缺点,应该和温室活体的盆栽试验结合起来。

室内离体平板法:
(1)孢子萌发测定法
(2)抑菌圈法
(3)生长速率测定法
(1)孢子萌发测定法
有载玻片萌发法及平板培养基培养法。
即将不同的药液喷布于玻片表面或平板上,定量
滴加孢子悬浮液,药液与悬浮液接触后,经一定培育
时间,镜检孢子萌发的百分率,载玻片法适合于水溶
性较好的保护剂,能计算单位面积药液的沉积量及药
液浓度,接近实际条件,但对萌发时需氧较多的病原
菌不适用。
平板萌发适用于不易分解的保护剂,根据测定对象生长需要的配方来制备合适的培养基,由于孢子在培养基的表面能得到较充足的空气,萌发时不致因缺少氧而受影响。
(2)抑菌圈法
广泛地应用于真菌细菌的杀菌剂筛选,基本原理是将病原菌孢子或菌丝的悬浮液与琼脂培养基混匀冷凝后,在培养基平面放上消毒的并蘸有不同浓度药剂的圆形滤纸片(直径6mm)左右,或放特制的直径8mm高10mm的不锈钢环,将配好的药液定量加在钢环内,经定温培养一定时间后,由于药剂的扩散作用,使病菌生长受到抑制,即形成“抑菌圈”。测量抑菌圈的大小,以比较杀菌剂的毒力。
(3)生长速率测定法
即在琼脂培养基中加入药液,冷凝后接菌的方法,用木塞钻孔器切取正常培养基上的供试菌丝体,放在平板上(也称菌碟),经一定时间后观察测量菌落生长速率,一定时间菌落直径的长度与对照组比较,求出抑制百分率,绘浓度对数---抑制百分率毒力曲线图,以ED50来比较毒力程度。
平板测定是室内杀菌剂活性测定最常用的方法,优点是条件比较一致,影响因子比较单一,活性效应显现较快,缺点是有时与活体测定结果不一致,有时会漏筛或误筛,如用粉锈宁处理大麦白粉病菌,离体测定不仅分生孢子能萌发且能形成吸器,但此药在活体上却表现高效。所以初筛手段不采用平板法,采用盆栽法,即病原---寄主植物组合法。

在温室内进行的,具体方法随各种不同病害而异,例:小麦赤霉病采用分生孢子---幼苗组合法,根据杀菌剂物不同作用机理,有测定以下作用的方法。
(1)保护作用;(2)治疗作用;
(3)内吸作用。
(1)保护作用:
一般经定量喷雾法处理供试植物,喷药后间隔一定的时间再接种(方法很多,如多针接种,剪叶法或将菌丝块贴在叶片上等),保持发病所需的温、湿度条件,发病后再按病情分级标准进行统计,以病叶率,病情指数增长等指标判断药效。