GLS%2fIL-12重组沙门菌抗肿瘤的实验研究.pdf

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捌磷酸盐吐温缓冲液阛碼诅∞磷酸盐缓冲液聚合酶链反应酸碱度碘化丙啶分泌正常赴泶肿瘤坏死因子一ⅡⅥ僵
日期:幽’.塑—必重庆医科大学研究生学位论文独创性声明学位论文版权使用授权书论文作者签名:指导教师签名:期:究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢豹地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我同工作的同志对本研究所傲的任何贡献均己本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本入保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,可以采用影印、缩印或其他手段保日本人申明所里交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。学位论文作者签名:存论文。
重组沙门菌抗肿瘤的实验研究摘要疘国家。在我国肿瘤死亡已位居各类死因第一位,每年死于肿瘤的人数技术的飞速发展继手术治疗、放射治疗和化学治疗后的一种新型治疗手段。目前,肿瘤的基因治疗已成为备受瞩目的研究领域。了能将该质粒递送到肿瘤组织的重组沙门菌,在小鼠黑色素瘤模型上人钚噪暮托∈:构建能分泌表达人钚噪暮托∈驣恼婧斯脖泶肿瘤是一类严重危害健康、影响生活质量的重大疾病。目前全球每年因癌症死亡的人数约为颍ヒ陨戏⑸诘褪杖牒椭械仁杖约颉;.,并构建观察了局部注射和口服给予重组沙门菌的抗瘤作用。第一部分质粒一痬一,并检测其表达。方法:将置陔牡谋嗦胄蛄屑尤氲揭镄蛄兄校院珿基因缓置陔的质粒D0澹捎肞扩增出含分泌重庆医科大学博士研究生学位论文’重庆市自然科学基金资助项目
肽基因的人钚噪幕颉H缓蠖ㄏ蚩寺∪胝婧斯脖泶镏柿的多克隆位点,=〉:成功扩增出含分泌肽编码序列的人钚噪幕颉9菇的真核表达质粒经盖泻退虿庑蚣ɑ序列完全正确。.H鞠赴璕┰龀鎏匾煨笥业哪康奶醮壕庖呦赴Ъ觳獾阶H鞠赴诿飨缘淖赜色表达颗粒。,经因条带;转染细胞上清中用约梁屑觳獾絩姆置冢蛔染细胞上清用觳獬鱿置飨缘陌叩恪结论:成功构建能分泌表达人钚噪暮托∈螈笠恼婧斯达。将质粒械男∈.。转染细胞后,。扩增出特异性笥业腉基因和一基表达质粒,痬.。.重庆医科大学博士研究生学位论文
第二部分人钚噪暮托∈驣基因真核共表达质粒一痬奶逋饪沽鲂в以检测肿瘤细胞内谋泶铮缓蟛捎肕法检测其对结果:用检测到贐中表达的特异性条带。比空质粒对照蛲雎.%龈吡嗽ァWH旧ǔ闪晾渡ǎ骄蛲鲋甘.%;而空质粒对照细胞核形态正常,染色浅淡,凋亡指数为目的:检测人钚噪暮托∈。方法:;用赴邓溃蛲觯O胞鉴别试剂盒疎染色观测肿瘤细胞的凋亡;用和碘化丙啶双染检测细胞凋亡早期细胞膜的变化,流式细胞术检测凋亡细胞的数量。法检测,.%,.,笙赴雠荩赴伺ㄋ酰致密,碎块状,±!埃ァWH竞∈焙∈保琢鱿赴瑼疎旧谟ü显微镜下区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。正常细胞被染成绿色,细胞与胞核形态正常。坏死细胞由于失去了核膜的完整性,细胞核被重庆医科大学博士研究生学位论文
突起等形态,细胞被染成橙色,核形态不规则。:一痬一转染小鼠黑色素瘤细胞芤第三部分携带人钚噪暮托∈驣基因的重组沙门茵的构建目的:构建携带人钚噪挠胄∈螈螅虻闹刈樯趁啪以电转化的方式将一痬一质粒转入细菌构建重组沙门菌,抽提质粒进行小鼠巨噬细胞,通过和细胞荧光表达观察反映重组菌向真核细后提取细胞总肦ɡ┰鯣基