实验蛋白质的两性电离及等电点测定.ppt

实验一蛋白质两性电离与等电点【教学目标】1、独立操作,一丝不苟地作实验。2、仔细观察不同阶段试剂颜色变化及沉淀的出现和消失,通过现象观察能分析蛋白质两性电离的性质,正确填写实验报告。3、通过往五支不同pH值溶液的试管内加入酪蛋白,观察沉淀出现的情况,确定其等电点。4、共同讨论测定等电点的原理。一、蛋白质的两性电离多肽链中氨基酸残基中有可解离基团,如:末端-COO-、-NH3+,酸性氨基酸侧链-COO-,Lys的ε-NH3+,Arg的胍基,His的咪唑基。*蛋白质的等电点(pI)当蛋白质溶液处于兼性离子,净电荷为零,此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。NH3+NH3+NH2PPPCOOHCOO--COO-正离子兼性离子负离子pH<pIpH=pIpH>pI+OH-+OH-+H++H+各种蛋白质的氨基酸组成不同,解离情况不同,等电点不同。。蛋白质的性质之一:两性电离与等电点【实验原理】蛋白质分子是两性电解质。蛋白质在溶液的pH值为等电点时游离为两性离子,溶解度最低,容易沉淀析出。若在大于或小于等电点的溶液中,因蛋白质分子带有同种电荷而相互排斥,不易产生沉淀。【试剂】1、%酪蛋白醋酸钠2、%~。指示剂的酸色型为黄色,碱色型为蓝色。3、、、、、【操作】1、蛋白质的两性电离(1)取一支试管,%%溴甲酚绿指示剂2滴,摇匀。观察溶液颜色,记录,并分析原因。(2),、边滴边摇,直至有明显的大量沉淀发生,此时溶液的pH值接近酪蛋白的等电点。观察溶液颜色的变化,记录,分析原因。(3),观察沉淀和溶液颜色的变化,记录,分析原