高效液相色谱仪操作步骤: 1).过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜。2).对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3).打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道,连接检测系统。4).进入HPLC控制界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。5).有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵,直接在泵的出水口,用针头抽取。冲洗进样阀,需要在manual菜单下,先点击purge,再点击start,冲洗时速度不要超过10ml/min。6).调节流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越大,压力越大,一般不要超过2000。点击injure,选用合适的流速,点击on,走基线,观察基线的情况。7).设计走样方法。点击file,选取selectusersandmethods,可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法,点击newmethod。选取需要的配件,包括进样阀,泵,检测器等,根据需要而不同。选完后,点击protocol。一个完整的走样方法需要包括:,一般2-5分钟;;-inject转换;,随不同的样品而不同。8).进样和进样后操作。选定走样方法,点击start。进样,所有的样品均需过滤。方法走完后,点击postrun,可记录数据和做标记等。全部样品走完后,再用上面的方法走一段基线,洗掉剩余物。9).关机时,先关计算机,再关液相色谱。10).填写登记本,由负责人签字。高效液相色谱仪使用注意事项:1、泵正常工作时,在流动相和流速不变的前提下柱压应该是稳定的,当然在换流动相时压力变化是正常的,正常情况下如果柱压升高基本上都是由色谱柱使用时间长引起的(只有更换色谱柱),如果正常情况下压力突然降低有可能是(1)接头处有漏液的地方,采取的方法是有滤纸检查,如有漏液的地方用扳手拧紧即可。如果没有漏液则可能是(2)白色的管子里面有气泡从而导致流动相进不到泵里面去,采取的方法是排气泡排气时:先STOP停泵—打开排气阀—按PURGE(快冲)键—等气泡排完后先STOP停泵—拧紧排气阀,其先后步骤不要搞反了。Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;mercialuse2、泵正常工作时最高压力最好不要超过200KG,所以打开泵以后可以将泵的最大压力调到200KG,这样如果压力超过上限则会自动报警停机,流速最好不用超过1ML/MIN,如果使用时压力超过200KG,建议将流速调低点以降低压力(在色谱柱正常的情况下),如果是因为色谱柱长时间使用
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