Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;mercialuse蚆微量凯氏定氮法膄姓名:周超膈学号:0067罿班级:11级生命基地莆同组者:刘炳煜羁时间:2011年6月4日薁【实验目的】蒈1、掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理和方法。肆2、学会使用凯氏定氮仪。羂【实验原理】虿凯氏定氮也称克氏定氮。样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨(消化),氨又与硫酸作用,变成硫酸氨。然后经强碱碱化使硫酸铵分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度,即可计算的样品之含氮量,若以甘氨酸为例,其反应式如下:袈NH2CH2COOH+3H2SO4→2CO2+3SO2+4H2O+NH3(1)袇2NH3+H2SO4→(NH4)2SO4(2)肄(NH4)2SO4+2NaOH→2H2O+Na2SO4+2NH3↑(3)肁反应(1)(2)在凯氏烧瓶内完成,反应(3)在凯氏蒸馏装置中进行(如图1),其特点是将蒸汽发生器、蒸馏器及冷凝器三个部分融为一体。由于蒸汽发生器体积小,节省能源,本仪器使用方便,效果良好。芇为了加速消化,可以加入CuSO4作催化剂,及硫酸钾以提高溶液之沸点,收集氨可用硼酸溶液,氨与溶液中的氢离子结合生成铵离子,使溶液中氢离子浓度降低,指示剂颜色发生改变,然后用强酸滴定,所用无机酸的量即相当于被测样品中氨的量,~。薇凯氏定氮法常用于测定天然有机物(如蛋白质,核酸及氨基酸等)的含氮量。袁图1微量凯氏定氮蒸馏装置膀【实验试剂】螆实验仪器肃微量凯氏定氮蒸馏装置袃100ml锥形瓶6个芈5ml移液管膆10ml量筒袄电炉羄铁架台蚀酸式滴定管衿沸石薄实验材料螁牛奶蝿浓硫酸艿K2SO4·%【实验步骤】螅将凯氏定氮仪器的装置仪器安装好。蚁样品的消化:牛奶:水=1:1的样品2ml,加入4mlH2SO4,再加入200mgK2SO4•CuSO4催化剂,加热,消化至消化液由褐色变淡直至淡黄色,冷却,加入双氧水数滴,继续加热至消化液至浅蓝色,冷却定容至100ml,备用。蚂空白的制备:样品部分换成水,其他的操作与操作2相同。薇仪器的洗涤:在蒸气发生器内加入5mL浓硫酸和2滴甲基橙,并加蒸馏水总量加至容器容积的2/3,接收瓶内加入5mL混合指示剂,加热;如果接收瓶内指示剂不变色则表明洗净,关闭电炉,在小漏斗内加入蒸馏水,打开止水夹,将水放入,将废液倒吸出。薆标准硫酸氮含量测定:接收瓶内加入5mL硼酸,反应室内加入1ml(NH4)2SO4(样品测定时,加入2ml样品),10ml30%NaOH溶液,加热;待混合指示剂变为淡绿色时计时3min,然后使液面离开冷凝管口约1cm,并用少量去离子水洗涤冷凝管口,继续蒸馏1min。然后用标准盐酸进行滴定,平行测定三次。螃样品的测定:相同的方法测定,空白测二组,样品平行测三次。螀【实验结果】羆(一)实验数据芆1、标准硫酸铵含量测定螄组数衿消耗标准盐酸量()/、样品含量测定芃组数蚄消耗标准盐酸量()/
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