pcr仪及凝胶成像系统.ppt

PCR仪和凝胶成像系统仪器分析实验——分子生物学实验技术内容PCR的反应原理及反应体系PCR示例凝胶成像系统多聚酶链式反应(PCR:PolymeraseChainReaction),此技术获得1993年诺贝尔化学奖。体内DNA的复制体系DNA聚合酶(IIIIII)拓扑异构酶解旋酶类SSB引物dNTPMg2+5’3’模板Mullis的PCR构思引物引物DNA聚合酶DNA聚合酶特定DNA片段模板Mg2+dNTPthermusaquaticusTaqDNA多聚酶的发现1988年Saiki等从温泉( Hot spring)中分离的一株水生嗜热杆菌(thermusaquaticus)中提取到一种耐热DNA聚合酶。Heat-stablepolymeraseisvitaltotheeaseoftheprocess…TaqDNA聚合酶(thermusaquaticus)酶活性(%)温度(℃)405060708090100**********此酶的发现,被PCR广泛应用。在 1989 年,Science 将PCR中的TaqDNA多聚酶命名为当年的风云分子 (Molecule of the year)酶量增加使反应特异性下降;酶量过少影响反应产量。反应体系中:-l耐高温TaqP1P2PCR反应体系dATPdTTPdGTPdCTPMg2+模板:DNA引物:P1P2DNA聚合酶:Taq原料:dNTP辅助因子:Mg2+五要素反应条件PCR反应条件72℃94℃55℃PCR循环变性退火延伸温度三点法温度、时间和循环次数。PCR反应条件变性使双链DNA解链为单链94℃,20-30秒(2)退火温度由引物长度和GC含量决定。增加温度能减少引物与模板的非特异性结合;降低温度可增加反应的灵敏性。一般为45~65℃,30秒PCR仪