棉花中一个新parvulin类型肽酰脯氨酰顺反异构酶功能分析.pdf

中文摘要蛋白质的正确折叠是其发挥生物学功能的基础。在细胞内,分子伴侣及折叠酶可以硫键异构酶F渲校琍能通过催化肽酰脯氨酰键的异构化加速并帮助蛋白质的正确折叠。到目前为止,难芯恐饕<性诓溉槎锖驮松镏校参锾迥诘难究极少。作物在生长发育过程中通常会受到胁迫的影响,在逆境下,蛋白质会因变性而用。盐胁迫是危害农作物的主要非生物胁迫之一,盐胁迫下会导致某些基因的表达上调或下调,对这些基因及其编码蛋白的研究有助于阐明抗盐机制并对提高作物抗盐能力提被嵝蛄型葱苑治霰砻髅藁脱位駻嗦氲牡鞍字适粲赑中的同源分析,预测该蛋白属于衟易逯械某稍保颐墙ǜ没虮嗦氲牡鞍质命名为吹鞍拙劾喾治霰砻鱃与、进化距离比较近。为了确定此类蛋白进行聚类分析并绘制了进化树。结果表明,桶俾龈鵏葱愿叽形虫等中的葱砸泊锏ィ砻鞲美嗟鞍自诮细叨缺J亍3薈一端酶结构域高度保守外,腘一端富含,与人类的、帮助蛋白质完成正确折叠。折叠酶主要包括肽酰脯氨酰顺反异构酶偷鞍字识导致生物功能的丧失,分子伴侣及折叠酶在维持蛋白质天然构象方面起非常重要的作供了理论依据。我们对前期筛选到的一个棉花盐胁迫下表达上调的基因进行功能分析研究,主要结果如下:的易濉@妹拦⑸锛际跣畔⒅行菘猓珺比对发现,该基因编码包含霭被岵谢牡鞍字剩渲位氨基酸之间即┒⑾%,与拟南芥、水稻及玉米葱愿叽ザ唷S肴说膆靶∈蟆⒈腘端同源性比较高。駻吮泶锊锞哂蠵酶活性。将该基因构建到载体上并转入大肠杆菌中进行原核表达,在编码蛋白的┒颂砑親标签,利用猼亲和层析的方法纯化该蛋白。以含有脯氨酸的小肽为底物,分析该蛋白催化的肽酰脯氨山东农业大学硕士学位论文
ü唇<胺肿佣越油撇饬薌的必需氨基酸残基。利用分子模拟同了鯣对应位置的保守氨基酸残基;用果,选择了个氨基酸位点,对编码基因进行了定位突变,经原核表达和蛋白纯化后,酰键顺反异构转换活性。结果表明该蛋白具有钚裕梢源呋孽8滨K撤唇峁之间的转换,且催化反应的速度依赖于ǘ取8菸颐嵌訬菘獠檎遥馐植物中首次鉴定到的与盐胁迫有关的家族稍薄源建模建立了娜占浣峁梗雙易迤渌稍苯峁褂蛲葱员冉险页分子对接软件对偷物进行对接模拟,找出了锌赡懿斡氲孜锝岷霞按呋陌被岵谢觯其中包括了用分子模拟同源建模预测的霭被岵谢U饬街址椒ㄍ撇獾慕峁疚厶ü奘渭岸ǖ阃槐涞姆椒ㄈ范℅的必需氨基酸。用专一性化学修饰法对可能的必需氨基酸进行了初步检测。结合同源建模、分子对接及化学修饰的结研究了不同位点对钚缘挠跋臁F渲个位点氨基酸即和槐浜螅富钚韵陆ヒ陨希个位点氨基酸即和突变后,酶活性下降%左右。以上结合化学修饰、结构模拟及分子对接结果,我们认为这霭被酸为幕钚员匦璋被帷也具有分子伴侣活性。芤种票湫缘募∷峒っ冈谙∈透葱怨中的聚沉,初步说明哂蟹肿影槁禄钚浴M槐涮錚活性分析表明,及位点突变后,抑制聚沉的能力下降。藁℅在盐胁迫下上调表达,而我们的实验又证实了它具有异构酶及分子伴侣活性,这表明它的分子伴侣及折叠酶功能可能在植物的逆境胁迫中起非常重要的作用。关键词:肽酰脯氨酰顺反异构酶;盐胁迫:必需氨基酸;分子伴侣;棉花棉花中一个新的类型肽酰脯氨酰顺反异构酶的功能分析:
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把过程;第二部分是指肽链经过疏水塌缩、空间盘曲、侧链叠集等折叠过程形成蛋础,也就是说,这个一维信息向三维信息的转化过程是表现生命活力所必需的。一天然状态的形成并不需要能量或其它辅助因子的参与氨基酸序列中的~维信息是如何翻译形成多肽链唯一确定的空间结构的呢钦飧问题,使得阐明蛋白质折叠的分子机制成为当前研究的热门课题之一。肽链指导下完成,这一套密码相对于三联体密码来说称之为“折叠密码”或“空间密码’’,又称之为“第二遗传密码”。研究蛋白质折叠对于破译第二遗传密码具另外许多重大疾病与蛋白质错误折叠有关,即所谓的“折叠病Mü糯ń大量相关疾病的生成。诸如老年性痴呆症和海绵样脑病等淀粉样变性病。了诸如疯牛病、老年痴呆症等一系列神经性疾病的原因,,生命信息的流动可以分为两部分:第一部分是指蛄兄的遗传信息通过转录和翻译传入蛋白质的一级序列中