薄细菌性灭活菌苗制造(简称灭活菌苗,其种类、苗型繁多,但制作的基本程序和技术要求差别不大。以猪链球菌为例)袄一、菌种分离用典型猪链球菌患猪病料分离猪链球菌,猪链球菌在组织涂片中常呈单个、呈双及4~8个短链状排列,液体培养物中呈长链状排列革兰氏染色阳性。在鲜血琼脂平板上划线分离,猪链球菌形成透明、半透明小菌落,呈β型溶血。选择致病力强,抗原性好的菌株作为生产菌种备用。膈二、细菌的培养增殖将猪链球菌接种鲜血琼脂平板,370C18-24小时培养,用灭菌生理盐或PBS液洗下菌体(30亿个细菌/ml)。蒇三、%甲醛,370C灭活24小时。羄四、配苗与分装每5份灭活菌液加入灭菌的氢氧化铝胶1份,%的硫柳汞防腐。分装时菌苗应混合均匀,即时加塞密封贴鉴。蚅五、安全检验选健康家兔两只,各皮下注射疫苗5ml,小白鼠2只,,应健康存活。膀六、用法用量皮下或肌肉注射衿七、保存期疫苗4度冰箱保存,保存期12个月。蚇病毒性自家组织灭活疫苗制备膁兔病毒性出血症自家组织灭活苗芁一、病毒材料采集处理采取人工或自然感染兔瘟病死兔肝脏(10%肝悬液HA价在1:210以上)。去除脂肪,健膜及结缔组织,备用。羈二、组织匀浆将兔肝脏混合称重,剪碎,%甲醛PBS溶液,用组织捣碎机高速(10000转/分)匀浆2分钟,用灭菌纱布过滤,收集滤液,滤渣重复匀浆过滤。膆三、配苗将肝脏组织匀浆溶液合并,混合均匀,%甲醛PBS溶液配制成10%(W/V)肝组织悬液。袁四、灭活将10%肝组织悬液置37度灭活病毒,每2小时振摇一次,作用24小时即成疫苗。聿五、~2kg健康兔5只,3只肌肉或皮下注射疫苗5ml,2只作对照,观察6-7天应无不良反应。肆六、用法用量2月龄以上兔颈部皮下注射1ml,保护期6个月。薆七、保存期疫苗40C冰箱保存,保存期6个月。薂病毒灭活疫苗制备(新城疫油乳剂活苗为例)肀一、毒种弱毒株和强毒株均可使用,但是各毒株的抗原性不一致,在制备灭活苗时应加以选择,一般说弱毒株在鸡胚内繁殖的毒价比强毒株高,又无散毒的危险,所以,弱毒株更适于制造灭活疫苗,国内多采用Lasota株或ss株。葿二、病毒培养孵化鸡胚(-390C,9-10日龄)接种毒种(毒种以10-100倍稀释,绒毛尿囊腔接种,)继续培养(370C)收获尿囊液及羊水,病毒血凝价1:640以上。羅三、%甲醛,充分摇匀后于37度灭活16h;也可于鸡胚液加入1/1500BPL,,其间摇3-5次。莂四、油相配制可用96%7号白油或10号白油加入6%司本-80和2%硬脂酸铝,经高压灭菌20min备用。膁五、疫苗配制将灭活鸡的胚液加2%-4%吐温作为水相,以一定比例缓慢加入油相中,用组织捣碎机边加边搅拌,制成油包水乳剂苗。制成品呈乳白色。只要抗原含量相等,水油比例的变化不影响疫苗效力,含抗原量越多则免疫力越坚强。薇六、安全检验用任何年龄鸡20只分两组,每组10只,第一组肌肉注射1ml灭活苗,第2组肌肉注射1ml生理盐水作对照,饲养观察10天,第1组较第2组死亡数少或相等,注射部位反应轻微判为合格。莅七、效力检验用2-6周龄无母源抗体鸡20只,第1组10只肌肉
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