光合细菌的分离及培养条件研究.doc

光合细菌M-01的分离及培养条件研究[摘要]从湛江市霞山区海滩表层污泥中富集分离出红假单胞菌属光合细菌M-01,对其培养条件进行了初步探讨,结果表明:菌株生长温度为30e时,最适培养光照度为3000lx。培养基正交试验结果表明其最优培养基配方为:氯化铵2g,,乙酸钠4g,碳酸氢钠2g,氯化钠1g,,,,蒸馏水1000mL;其中乙酸钠为最大影响因子。[关键词]光合细菌(PSB);分离;培养;正交试验光合细菌(Photosyntheticbacteria)是一类光合自养型古老细菌,具有较强的分解有机物特性,光合细菌作为水质净化剂广泛应用于水产动物如一些经济鱼类、虾蟹、贝类的养殖和育苗中[1~4]。在生产上有意义的红螺菌科包括红螺菌属、红假单胞菌属和红微菌属[4]。现已有学者对红假单胞菌的分离、鉴定、培养特性及保藏做了研究[5~7],但还没有关于其营养条件优化的报道。笔者从海洋环境中分离到了光合细菌M-01,采用正交试验方法进行了培养条件优化的研究。现将结果报告如下。(1)待分离材料取广东省湛江市霞山区海滩表层污泥。(2)培养基使用红螺菌科富集培养基作为富集分离基础培养基[8]。(1)菌株的分离筛选方法取污泥10g,装入500mL细口无色玻璃瓶中,加入富集培养液至满,盖上瓶盖,隔绝空气,于30e,3000lx光照下进行富集培养3~4d,培养液呈绛红色后,取富集培养菌液1mL,转接入培养液中,重复以上操作2次,然后采用改良的Hungate厌氧培养技术)))柱滚管法[9]进行分离纯化,用分离培养基的琼脂柱穿刺培养后保存。(2)细胞色素光谱吸收峰值测定方法培养物离心后洗涤,将细胞悬浮于60%的蔗糖溶液中,采用722S分光光度计扫描,波长范围为340~1000nm。(3)生长量的测定为比较不同培养条件下(光照、接种量、营养条件)培养物生长量的差别,采用722S分光光度计检测培养物D660nm值。(4)光照度对菌株生长影响的测定将已接种的光合细菌培养液于温度30e,光照度分别为2000、3000、4000、5000、6000lx下培养3d,每组3管,用722S分光光度计测定培养物菌液光密度D660nm(用培养初刚接种的培养液为空白对照)。(5)酵母膏添加量对菌株生长影响的测定在培养液中分别加入酵母膏,令其质量分数分别为0100、0105、0110、0115、0120、0125、0130g/L。(6)培养基正交试验根据预备试验,设计5因子4水平的正交试验(表1),在温度30e,3000lx光照条件下进行培养基的正交试验。#72#长江大学学报(自科版)2005年8月第2卷第8期/农学卷第25卷第3期JournalofYangtzeUniversity(NatSciEdit),Vol125No13表1培养基正交试验因素水平Table1Factorlevelsoforthogonalexperimentoftheculturemediag/L水平A氯化铵B磷酸氢二钾C乙酸钠D碳酸氢钠E酵母膏101501121001501052110012310110011031150134101150115421001451021001202结果