南海沉积物中酯酶基因克隆表达及其酶学性质的研究.pdf

。甌魅琫琾.,琽瑂.,.,琧甌..%,疻.·;;瓻琧琣琽產,甀.—.,..篠;
录引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.第一章材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯.实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..笛榫昙翱寺≡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..文库筛选试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...筛选培养基⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.筛选目的菌株的方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.┰⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..琼脂糖凝胶电泳片段回收⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.片段连接⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.转化感受态细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...酶切片段与质粒的连接和转化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...伴侣蛋白质粒的共转化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯目..
.共转化菌株的蛋白诱导表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..共转化菌株的蛋白纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..酯酶的最适反应温度⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯.酯酶的最适反应值⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..阳离子对酯酶活性的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.有机溶剂对酯酶活性的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..去垢剂对酯酶活性的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯...酯酶热稳定性研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.酯酶稳定性研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..第二章结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯.酯酶基因的克隆⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯酯酶基因的序列测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯共转化质粒的提取⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯共转化后蛋白的诱导表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯重组酯酶的纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯酯酶酶学性质⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...
结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..攻读学位期间的研究成果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯学位论文知识产权权属声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
引言的生物活性的微生物越来越困难,对陆地微生物资源的重复开发率已经接近%。在地球上,海洋环境是最大的生态系统,地球生物中的%都是在海洋环境里生存的【浚凶偶7岣坏纳镒试矗绕涫呛Q笪⑸镒试础S肼降厣系奈⑸锵啾有重要的意义。除此之外,环境污染、可持续发展等问题也迫切的要求我们利用起学活性物质的开发等方面有着广阔的前景,也有益于人们更好的了解微生物在地球物质及能量循环过程中的作用。根据对海洋微生物与陆地微生物的共同研究,人类在分离海洋微生物的过程中,人们不断的创新出各种分子生物学技术对其进一步的研究利用。但与此同时,人们也发现海洋微生物中的大部分都无法对其培养和海洋系统独特的环境使得海洋微生物不仅种类繁多而且具备很多陆地微生物不陆地微生物资源在人类的发展进程中不断的被开采发掘,在陆地上寻找具有新较,人们对海洋微生物的认识还很少,因此从海洋环境中寻找具有新活性的物质具海洋微生物这一资源宝库【。对于人类而言,海洋微生物多样性的重要意义更在于它具有更多陆地微生物稀缺的新型基因型,这些各具新功能的基因不仅在酶学及医将更加深入的了解地球微生物的分布结构及分布特征,地球整个微生物系统的进化过程等等【。利用。因此,人们在实验方法及手段上不断创新,希望能够开发更多的海洋微生物资源为人类所利用【。具有的新型生物功能基因,这些功能基因可以通过分子克隆等方式作为工业用酶应用于人们的生产及生活当中。除此之外,海洋生态环境的多样性也为工业用酶的筛选提供了天然优质的进化条件诠憷ǖ暮Q笊低持幸欢芄徽业接牍ひ瞪条件相类似的环境,这使得从这种相似性极大的环境里筛选到高产量、高活性的工业用酶成为可铡發╦。