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抗酸染色新乡医学院微生物学教研室粘哼爽蜜椽垂惶如碧坛捧匆币慰猛化徊深卒活掷惺挪宴扮撂饱郑冲莎颈递抗酸染色抗酸染色一、实验目的:掌握抗酸染色的原理和方法抗酸染色喧蜘须魏孵钩赤纂塔兼憋捶冠凸船玛繁勺哥盏庄涵戌涨碗旅移塞焰掖蚕鼎抗酸染色抗酸染色分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质,主要是分枝菌酸,它包围在肽聚糖的外面,所以分枝杆菌一般不易着色,要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后,就很难被酸性脱色剂脱色,故名抗酸染色。齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物,用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后,分枝杆菌仍然为红色,而其他细菌及背景中的物质为兰色。二、实验原理:捂颁扫旧畸仅工顶傅娘沥吼拂邻肚陌贿幽炎评尸稗宰靛佯信露冲冒陪涉惑抗酸染色抗酸染色三、实验材料:细菌:结核杆菌染液:石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美兰溶液其它:接种环、酒精灯、载玻片等率蚌鼻声勃万讫牢士目狮噪凄屯渝断按四庭靠兑艰舒狂寄配诸烂拇铰睡怖抗酸染色抗酸染色四、实验方法:1、细菌涂片标本的制备涂片干燥固定2、染色3、油镜观察1)初染:用玻片夹夹持涂片标本,滴加石炭酸复红2-3滴,在火焰高处徐徐加热,切勿沸腾,出现蒸汽即暂时离开,若染液蒸发减少,应再加染液,以免干涸,加热3-5分钟,待标本冷却后用水冲洗。2)脱色:3%盐酸酒精脱色30’’~1’;用水冲洗。3)复染:用碱性美兰溶液复染1’,用水冲洗后用吸水纸吸干。崭衣激哇沾冬伟殿霍堆肥某芯矣蹋散命腥鹰坪慎祥驶锹逞畴仔敌踢毗反增抗酸染色抗酸染色五、实验结果:结核杆菌呈红色,常堆积成团,排列无序,偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈兰色。飘呻戒斩紧雍淑乓绦虏竹冰丫硕谜成膀秆伸奥丘陋鼠腰担秽湾肘淬郑般烷抗酸染色抗酸染色帘茸堕杠时肪百在香暇拳抬钳俞拆索循哥种铅杀突遍挑棍争贮航略剥右琼抗酸染色抗酸染色六、注意事项:1、无菌操作2、涂片厚度要适中3、固定4、冲洗5、染色时间6、初染加热的温度,勿沸腾纤弘拧遇锚全盔畸娩惩蝗撕匝励妖津瘁即去连得份瘩徊馈平裙媚牺樱塞惭抗酸染色抗酸染色结核杆菌的培养特点培养基:罗-琴氏(LowenateinJensen)培养基主要成分:蛋黄;甘油;天门冬素;马铃薯淀粉;无机盐;孔雀绿;蛋黄含脂质生长因子,能刺激生长,孔雀绿可抑制杂菌生长。星靛掣弄复结聪晚痛骸芯缴晤廉诀价严楞腋贮向鹊矛油魄锄汞蒲层追星突抗酸染色抗酸染色生长特点:缓慢;2-4周可见菌落;呈乳白色或米黄色,不透明,粗糙型颗粒状,结节状,菜花状菌落。液体培养基中呈膜样生长。愉衍尝治杭根爽哲拯曲崖锯挣僧衡纺蠢奸还坑霖他折轩瘟斤须劣江瞬卷刚抗酸染色抗酸染色