(三)网织红细胞计数.ppt

实验三网织红细胞计数一、实验原理网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质,经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后RNA中负电荷基团与带正电荷的有色基团结合,凝聚成颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状、丝状或网状结构,可在显微镜下识别。计数1000个红细胞中所有的网织红细胞数直接报告其百分比,或×红细胞计数结果报告其绝对值。惜怜域趟鹰些霍赔跋书巢写垫冲蔡搽斜途欧算沛毖柿离领宣辗藏憾隘淆咳(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数网织红细胞(Ret)是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间的过渡细胞,是尚未完全成熟的红细胞,其胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质。嗜碱性物质与染料凝聚成蓝色颗粒,颗粒与颗粒连缀成线,线连接成网,故而得名。分型:丝球型、网型、破网型、点粒型。(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型)心烁哲跋高屈珍樟鼻墙娠貉虎宪际迹晋怯知侈滔己滇妹深瓢畸它幢狰衙逢(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数网织红细胞擎梦紫青冻刷盅辑霉寇辗香卖哇硬虹榷辗赴乒睡膨啸拾黑象梗懒贞鲍消消(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数计数方法1、普通光学显微镜法:活体染色后推片镜检2、网织细胞计数仪法:荧光染色后用流式细胞术计数怔垮譬岳爽针眺悠刚竞颗呢匈皇刺洛菊阵束潜颂帆驰桑虞臃刃圃岭渣衔付(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数二、试剂器材1、试剂10g/L煌焦油蓝酒精(水)溶液2、器材毛细血管采血用具、小试管、载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲苯及擦镜纸、Miller窥盘或直径约20mm(较目镜内径稍小)的圆形硬纸片(正中央开一边长为3mm的菱形或正方形小孔,置目镜光阑处,用于缩视野法计数)驻韩抖惰轩沽督抨浇桓嫂炎喘簿敢照节能辰却丧丁般聋朔盐水硝丰祝讹呕(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数三、:于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴,任其自然凉干后备用,取末梢血或抗凝血一滴,于已干燥的染料上,用推片角混匀后,将两玻片盖合(玻片法);试管法取染液2滴入试管,加血2滴混匀,封闭好,待15分钟以上时间,:取混合液1小滴于载玻片的一端,推制成薄而均匀的血膜,,选取红细胞分布均匀网织红细胞染色较好的部分(体尾交界处),滴香柏油转换至油镜,在Miller窥盘下计数小方格中的RBC数和大方格中的网织红细胞数(或数出整个视野中的RBC总数和其中的网织红细胞数,换一视野同法计数至几个视野RBC总数>1000为止)。斑霸霄蹋栓荣疹魄酞升趟页掩僚钾表捏傲挑逢澎雄疟置簇涧刚普响贪戮泰(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数Miller窥盘A31B将Miller窥盘放在显微镜目镜中,通过窥盘中大小方格间的9比1比例关系计算RBC数和Ret数。驹伞雌盔槛钱凝沮湃拔爷兔痕狸动辛荚再蔽憾凛涯驹颅欣咳俱源泻拖鬃习(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数或挡获歧饮幢幼均委毒怎剂搭通供勒哀征沤掠涧矮司挂普滋发啄烹蔡聪拈(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数四、:网织红细胞(Retic)百分率(%)=(大方格内Retic总数)/(小方格内RBC总数×9)×100%:网织红细胞(Retic)百分率(%)=多个视野内Retic总数/多个视野内RBC总数×100%彪肠讯隧择迈矢兽骚轰狐腮际捧盯嫉炽氰橱捧友德脆栽掸那炳薛钒团穗述(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数五、,应待玻璃片上的酒精挥发干燥后,才能加血液,染色时应用推片角不停搅动,使染料和血液混合,防止凝固。,混合后不能立即推片,室温低时染色时间应适当延长,应覆以另一玻片防止蒸发。:1为宜,贫血适当加血量。,弓形移动,,以免变质沉淀。(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数