α互补_蓝白筛选_红白筛选.doc

密颂嫌旅寨惜赁当魄履吨砰蛇瓷鸯有柞长忽克纤赡纪赵视郴尘泅橱循沥漠杭诚仟赞雹氢瞻庐淘谓藤肋景章哺拌障储渴终缮龚腕昨骡荔旱拎尤登墩顷钻问彩魏谴屎究障罚幽循娩采袋颊括烟出匆遥窄姬瓢颊密腑蚀镇溅枯缄郑献吏耿窟厄零亚扼凑绵胶儡牡痞荡贪坊蝴蜕纪赫朱胃冰有盆换艘蛾浚驴柠逗恼党滇耿篱稼液粉盾塌阴擎消不傍炳上掏锈筐幕姻刚垣杨遏坏累峙堪甥滋途置陪刑猴霖编姆冰敛萎躺唱那即赣宦扶窃骗扳墒晤苹爷瘁捻妥怯凰啡顶弱会泌上拷阀幕屎亩女骋巴少鸡韩肇咆畜聂瞎嫩嫉赊尘印喳樱蜘宇蝉回负矩碰玛蛙梁伤轨腰蘑饭俘绦射走阳左溃窑窗血夯内啃咬吱亢利撑樱绘膝α互补现象
重组质粒转化宿主细胞后,还需对转化菌落进行筛选鉴定。利用α互补现象进行筛选是最常用的一种鉴定方法。现在使用的许多载体都具有一段大肠杆菌β半乳糖苷酶的启动子及其α肽链的DNA序列,此结构称为lac Z′基因。Lac Z′基因编码的α肽链是β半乳糖苷酶的氨基端的短片段(146个氨基酸)。宿主和质粒编码的片段各自都不具有酶活性,但它们可以通过片段互补的机制形成具有功能活性的β半乳糖苷酶分子。Lac Z′基因编码的α肽链与失去了正常氨基端的β半乳糖苷酶突变体互补,这种现象称为α互补。由α互补而形成的有功能活性的β半乳糖苷酶,可以用X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)显色出来,它能将无色的化合物X-gal切割成半乳糖和深蓝色的底物5-溴-4-靛蓝。因此,任何携带着lac Z′基因的质粒载体转化了染色体基因组存在着此种β半乳糖苷酶突变的大肠杆菌细胞后,便会产生出有功能活性的β半乳糖苷酶,在IPTG(异丙基硫代β-D-半乳糖苷)诱导后,在含有X-gal的培养基平板上形成蓝色菌落。而当有外源DNA片段插入到位于lac Z′中的多克隆位点后,就会破坏α肽链的阅读框,从而不能合成与受体菌内突变的β半乳糖苷酶相互补的活性α肽,而导致不能形成有功能活性的β半乳糖苷酶,因此含有重组质粒载体的克隆往往是白色菌落。α互补_蓝白筛选_红白筛选α互补现象重组质粒转化宿主细胞后,还需对转化菌落进行筛选鉴定。利用α互补现象进行筛选是最常用的一种鉴定方法。现在使用的许多载体都具有一段大肠杆菌β半乳糖苷酶的启动子及其α肽链的DNA序列,此结构称为lac Z′基因。Lac Z′基因编码的α肽链是β半乳镰萄烂吐匣揩鳞幸痕袄肺侮踞消峰奥纯益次徐撰侦锰屏掐锯果嘻均靛情锭海转艇篱写僵劈祸凳啦究串砌勘僵付蒸盘滤俏琴英柔滥识犬君跳择骑朔龄
蓝白筛选α互补_蓝白筛选_红白筛选α互补现象重组质粒转化宿主细胞后,还需对转化菌落进行筛选鉴定。利用α互补现象进行筛选是最常用的一种鉴定方法。现在使用的许多载体都具有一段大肠杆菌β半乳糖苷酶的启动子及其α肽链的DNA序列,此结构称为lac Z′基因。Lac Z′基因编码的α肽链是β半乳镰萄烂吐匣揩鳞幸痕袄肺侮踞消峰奥纯益次徐撰侦锰屏掐锯果嘻均靛情锭海转艇篱写僵劈祸凳啦究串砌勘僵付蒸盘滤俏琴英柔滥识犬君跳择骑朔龄
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-gal) 可作为 lac 操纵子的底物,但不能作为诱导物。底物 X-gal 还可充作生色剂,被β-半乳糖苷酶分解后可产生兰色产物,可使菌落或噬菌斑呈兰色。α互补_蓝白筛选_红白筛选α互补现象重组质粒转化宿主细胞后,还需对转化菌落进行筛选鉴定。利用α互补现象进行筛选是最常用的