粪大肠菌群操作细则.doc

芇粪大肠菌群多管发酵法蒃1、培养基、试剂与仪器薈本标准所用试剂除另有注明外,均为符合国家标准的分析纯化学试剂;实验用水为新制备的去离子水。肇单倍乳糖蛋白胨培养液:,加热煮沸至完全,分装于含有倒置的小玻璃管的试管中,每试管约8ml(先用移液管吸取7ml至试管中,再用滴管吸取营养液放至小玻璃管中,直至营养液溢出。注意小玻璃管中不能有气泡,若出现气泡,应将气泡排出后再注入营养液。),于高压蒸汽灭菌器中,在115℃灭菌20min,贮存于暗处备用。羂EC培养液:,加热煮沸至完全,分装于含有倒置的小玻璃管的试管中,每管8ml(操作方法同单倍乳糖蛋白胨营养液),于高压蒸汽灭菌器中,在115℃灭菌20min,贮存于暗处备用。膈培养基的存放蒄在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30℃的暗处,存放时应避免阳光直接照射,并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养液颜色变化,或体积变化明显时废弃不用。莁验所需仪器聿超净工作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、冰箱、酒精灯、天平、电炉、500ml广口瓶、烧杯、玻璃棒、玻璃发酵管、试管架、移液管、移液枪、接种环腿2步骤袆前期准备螁器皿灭菌(高压蒸汽灭菌):所用采集水样的广口瓶、玻璃试管、移液管、玻璃棒、接种环、移液枪枪头等器皿均需放入高压锅灭菌。螀广口瓶:将清洗干净的采样瓶盖好瓶盖,用牛皮纸、报纸等防潮纸将瓶盖、瓶顶和瓶颈处包裹好,用绳子绑好,置于121℃的高压蒸汽灭菌器灭菌15分钟。羇玻璃试管(已经装好营养液)、移液管、玻璃棒、接种环、移液枪枪头:用牛皮纸、报纸等防潮纸将其包裹好,置于121℃的高压蒸汽灭菌器灭菌15分钟。羄采样:采取水样时,可握住瓶子下部直接将已灭菌的带盖采样瓶插入水中,约距水面10~15cm处,拔瓶盖,瓶口朝水流方向,使水样灌入瓶内然后盖上瓶盖,将采样瓶从水中取出。如果没有水流,可握住瓶子水平前推,直到充满水样为止。采好水样后,迅速盖上瓶盖和包装纸。蒄采好的水样,应迅速运往实验室,进行检验,一般从取样到检验不宜超过2h,否则应使用10℃以下的冷藏设备保存样品,但不得超过6h。,根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。莇相对未受污染的水样接种量为10mL、1mL、。受污染水样接种量根据污染程度接种1mL、、、、。使用的水样量可参考下表1。(根据实验经验,、、,可根据水样的洁净度适当调整取样体积。)袃表1接种用水量参考表芀如接种体积为10mL,则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液5mL;如接种量为1mL或少于1mL,则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10mL中。。在37℃±℃下培养24h±2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显,可轻拍试管,有小气泡升起的为阳性。,用3mm接种环或灭菌棒将培养物转接到EC培养液中。℃±0.