呋喃妥因代谢物快速检测试剂盒说明书.doc

呋喃妥因代谢物(AHD)快速检测试剂盒说明书一、概要硝基呋喃类药物因有非常好的抗菌作用和药动力学的特性,曾经被广泛应用,作为禽类、水产和猪促生长的添加剂。但在长时间的实验研究过程中发现,硝基呋喃类药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变,正因为如此才导致此类药物禁止在治疗和饲料中使用。呋喃妥因在1995年被禁用。由于硝基呋喃类药物在体内很快就能被代谢,而在组织中结合的代谢产物则能存留较长的一段时间,所以在分析此类药物的残留时经常要分析其代谢后的产物,管理部门就以检测代谢产物为手段达到检测硝基呋喃类残留的目的。呋喃妥因代谢产物AHD;呋喃它酮代谢产物AMOZ;呋喃唑酮代谢产物AOZ;硝基糠腙(呋喃西林)代谢产物SEM。用来检测呋喃妥因代谢物的最常用方法是LC-UV,LC-MS和LC-MS/MS。酶联免疫方法结合了色谱技术,采用AHD衍生物的特异性抗体,具有很高的精确度,更灵敏的反应,较低的操作技术要求和短暂的检测时间,检测样本量大等特点在检测中很好的表现出来。该试剂盒可以测定肉类(鸡、猪、牛、鱼、虾)、牛奶和蜂蜜中呋喃妥因代谢物的残留量。二、原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留物AHD经衍生化后和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗呋喃妥因代谢物的衍生物抗体,加入酶标二抗后,用TMB底物显色,样本吸光值与其所含残留物AHD的含量成负相关,与标准曲线比较即可得出样本中呋喃妥因代谢物的残留量。试剂盒特性试剂盒灵敏度:、蜂蜜检测下限:\鱼等水产组织因存在一定的干扰,、鸡肉、肝脏组织……………………………75±15%蜂蜜样本……………………………………………90±15%交叉反应率呋喃妥因代谢物……………………………………100%呋喃唑酮代谢物………………………………………<%呋喃它酮代谢物………………………………………<%硝基糠腙(呋喃西林)代谢物…………………………<%三、试剂盒组成1、96孔酶标板×1块(包被有偶联抗原)2、标准液×6瓶:(1ml/瓶)0ppb,,,,,、酶标二抗12ml……………………红色帽4、抗体工作液7ml………………………绿色帽5、底物液A液7ml………………………白色帽6、底物液B液7ml………………………红色帽7、终止液7ml………………………黄色帽8、20×浓缩洗涤液40ml……………………透明帽9、2×浓缩复溶液50ml……………………透明帽四、所用仪器、试剂仪器:┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm┅┅匀质器┅┅振荡器┅┅离心机┅┅微量移液器:单道20ml~200ml、200ml~1000ml多道250ml试剂:┅┅乙酸乙酯┅┅正己烷(或正庚烷)┅┅K2HPO4·3H2O┅┅2-硝基苯甲醛┅┅甲醇┅┅亚硝基铁氰化钾()5·NO·3H2O)(供奶样用)┅┅ZnSO4·7H2O(供奶样用)┅┅浓HCl┅┅NaOH五、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时,都必须注意:(a)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。(b)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。样