老年与年轻大鼠脑出血后小胶质细胞反应的比较.doc

老年与年轻大鼠脑出血后小胶质细胞反应的比较
【摘要】目的探讨年龄对脑出血后小胶质细胞反应的影响。方法年轻(3个月龄)和老年(16个月龄)雄性S-D(Sprague-Dawley)大鼠(河南省实验动物中心提供)脑内注入100μl自体全血,观察与年龄相关的神经胶质细胞的反应。年轻、老年模型组大鼠分别在脑内注血后6、12、24、72 h、7、14 d时间点处死动物(每组6只)进行OX42免疫组化。假手术组(每组6只)作对照。观察OX42染色的阳性细胞表达。结果与年轻大鼠比较,老年大鼠脑出血后3 d有增加小胶质细胞的激活作用(OX42染色)。皮质、基底的小胶质细胞数决定其活化程度,老年大鼠在皮质、基底节有更明显的小胶质细胞活化。老年大鼠脑出血后3 d OX42阳性细胞数显著高于年轻大鼠,这种状况可持续到监测14 d(P<)。结论脑出血导致老年大鼠更严重的脑损伤很可能与过度的小胶质细胞活化有关,年老是影响脑出血后脑损伤的重要因素。
【关键词】脑出血; OX42;小胶质细胞;脑损伤;大鼠
小胶质细胞可由缺血和出血性脑卒中的损伤而活化〔1〕,变成吞噬性细胞,清除来自损伤部位的细胞碎片。然而,小胶质细胞也分泌许多类似自由基的毒性物质,可能参与脑损伤形成。有研究表明老年是影响动物及人类缺血性脑损伤的重要因素〔2,3〕。但老龄是否影响脑出血(ICH)后脑损伤,目前尚无动物模型方面的系统研究。澄清老龄ICH后脑损伤的机制有助于为ICH损伤制定新的治疗策略。
1材料与方法
、试剂Narishige型立体定向仪(日本),微量进样器(上海医用激光仪器厂)显微外科手术器械(上海医疗器械厂),奥林巴斯显微镜(日本)。SP免疫试剂盒(北京中杉生物技术有限公司),DAB显色试剂盒(北京中杉生物技术有限公司),OX42抗体(Serotec公司),OX42二抗(北京中杉生物技术有限公司)。
,体重分别为280~350 g和600~680 g。年轻、老龄SD大鼠各42只,分别按6、12、24、72 h、7、14 d时间点及假手术组随机分组,每组6只,制作ICH动物模型,于各时间点处死动物用于免疫组织化学切片。模型组动物分别从股动脉采血100 μl,在立体定向仪下,随机注入大鼠右侧尾状核,制作ICH模型。
〔4〕等报道的定位方法,将大鼠固定在立体定向仪上, mm右冠状缝处用牙科钻钻一直径约1 mm的小孔。模型动物用微量注射器通过26规量针( mm、 mm、 mm)以10 μl/min速度向大鼠尾状核内推注100 μl未凝自体全血。退针后,骨蜡封闭钻孔,缝合切口。
%水合氯醛(400 mg/kg)麻醉后先用生理盐水约300 ml灌注,后用4%多聚甲醛300 ml灌注固定,断头取脑,放入4%多聚甲醛中固定6 h,固定后,石蜡包埋,制作石蜡切片(片厚3 μm),免疫组化过程严格按说明书操作。PBS代替一抗作为阴性对照。
、突起着色,免疫组化阳性细胞显色为棕黄色