细胞传代实验报告.doc

,为生物技术在医学上的应用打下基础。二、原理从生物体中取出某种组织或细胞,模拟体内生理条件,在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代,这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞,并在有控制的环境条件下进行实验,避免了体内实验时的许多复杂因素,还可以与体内实验互为补充,可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象,耗费少,比较经济,因此成为生物学研究的重要手段。细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养,即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph值、无机盐影响,消毒、配液等均有严格的规范和要求,特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。三、材料和试剂1、细胞:293细胞株2、试剂:%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清)3、仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、电动枪,培养板,吸液枪,5ml玻璃吸管、酒精灯等四、操作步骤1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。2、加入1~%胰酶溶液,使板底细胞都浸入溶液中。3、马上吸走胰酶液,再次加入2ml左右的胰酶,同样马上吸去,再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液,(剩余的细胞拿来做细胞计数),,:消化液配制方法:,加入100ml10xpbs+纯水溶解到1l,滤器过滤除菌,4℃保存,用前可在37℃下回温。10xpbs配方:na2hpo4()kh2po4()nacl(80g)kcl()(调至ph=)五、实验结果传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上,2天左右就在瓶内形成单层,达到七八成满。这时需再次传代六、讨论与反思无菌操作中的注意事项在无菌操作中,一定要保持工作区的无菌清洁。为此,在操作前要认真地洗手并用75%乙醇消毒。操作前20~30分钟起动超净台灭菌。培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞,打开之前和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下,打开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成。操作完毕后,加上瓶塞,才能拿到超净台外。使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端,将尖端在火上烧一下,戴上胶皮乳头,然后再去吸取液体。总之,在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行。每天观察细胞形态,掌握好细胞是否健康的标准:健康细胞的形态饱满,折光性好,生长致密时即可传代。多做,熟能生巧篇二:细胞生物学实验传代培养一、【实验目的】1、了解动物细胞传代培养的基本原理。2、掌握动物细胞传代培养的基本操作,并对hela细胞进行传代培养。二、【实验原理】hela是henriettalacks的简称,henriettalacks是一位患有子宫颈癌的美国妇女的名字,在她死后,该细胞走被广泛散发到各研究