香鱼抗凝血酶基因(AT) cDNA 的克隆, 序列分析及组织表达特征.pdf

农业生物技术学报,2 011 年,第 19 卷,第 1 期,第 157~163 页 
Journal of Agricultural Biotechnology, 2011, , , 157~163 
研究报告 
A Letter 
香鱼抗凝血酶基因(AT)cDNA 的克隆、序列分析及组织表达特征
李长红陈炯 *  史雨红陆新江
宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室,宁波 315211 
* 通讯作者, jchen1975@ 
摘要抗凝血酶(antithrombin, AT)主要抑制凝血酶(thrombin)及其它凝血因子的活性,并具有重要的抗炎
活性。本实验从香鱼  (Plecoglossus altivelis)  肝组织 cDNA 文库中成功获得了香鱼 A T 基因的 cDNA 全序列 
(EMBL 登录号:F N429980)。测序结果表明,香鱼 AT 基因 cDNA 全长 1 487 个核苷酸,包含 1 个大的开放阅
读框(ORF),推测编码 1 个由 453 个氨基酸组成的蛋白,N  端 23 个氨基酸为信号肽序列。成熟 AT 具有与哺
乳动物 AT 相似的特征结构,包括:羧基末端附近的丝氨酸蛋白酶活性中心、6 个保守的 Cys 残基形成的 3 
个二硫键结构和 4 个 N­ 糖基化位点。氨基酸序列分析表明,香鱼 AT 与大西洋鲑(Salmo salar)AT 氨基酸序
列同源性最高,为 81%。系统进化树分析表明,物种 AT 的进化关系与目前接受的物种分类关系基本一致,香
鱼 AT 位于鱼类 AT 簇中,与大西洋鲑、红鳍东方豚(Takifugu rubripes)和斑马鱼(Danio rerio)AT 进化相关性
最高。AT mRNA 在健康香鱼的肝组织中表达量最大,在脾、肾和脑中表达量较低。实时荧光定量 PCR 结果
表明,在鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)侵染 4 和 8 h 的香鱼肝组织中 AT mRNA 表达量显著下调(P<0. 
05),但随着病程发展,12~  36 h,A T mRNA 表达水平显著上调(P<),揭示 AT 是一个病程相关蛋白,并参
与香鱼细菌感染导致的急性期反应。
关键词抗凝血酶,克隆,序列分析,组织表达特征,实时荧光定量 PCR 
Cloning, Sequence Analysis and mRNA Expression Pattern of Antithrombin 
Gene (AT) in Ayu(Plecoglossus altivelis) 
Li Changhong  Chen Jiong *  Shi Yuhong  Lu Xinjiang 
Key Laboratory of Applied Marine Biotechnology, Ministry of Education, Ningbo University, Ningbo 315211, China 
* Corresponding author, jchen1975@ 
DOI: .1674­
Abstract  Antithrombin (AT) i