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杏仁氰醇酶的特性研究

(生命科学学院生物技术专业叶展辉)
(学号:1999302238)

内容提要:本论文研究了来源于杏仁的氰醇酶的催化特性,系统探讨了不同温度, pH 及
金属离子等对酶活性的影响。测定了酶的动力学常数 Km 和 Vmax, 并研究了酶在常温和低
, 温度与 pH 对酶活性均有显著影响,最适 pH 值为 左右,动
力学常数 Km 和 Vmax 分别为 mM 和 ,并且发现该酶无论在低温还是在常温
条件下均具有良好的稳定性。
关键词:杏仁氰醇酶 Km pH 温度
教师点评:本文探索性的研究了不同的温度, pH 及金属离子对杏仁氰醇酶活性的影响,
测定了酶的动力学常数和 Vmax,并且发现酶在低温和常温下均具有良好的稳定性,这对于
研究 R-,实验设计
合理,所采用研究方法切实可行,实验数据充分,论证合理,论文写作严谨、规范,是一篇
优秀的本科毕业论文(点评老师刘森林) 。

前言:
本实验的主要内容和意义:在国内尚未有氰醇酶催化特性的相关报道,而国外亦鲜有对
氰醇酶催化特性系统的研究。本研究无论从理论意义还是从应用价值上均有诱人前景。在理
论上,深入研究酶的催化特性和反应机理提供理论依据,对于确定酶的最适反应条件有重要
的参考价值。在应用价值上,手性氰醇是一类非常重要的手性合成子,深入开展氰醇酶的催
化特性的研究,为大规模的工业化生产准备了条件,为手性药物的研制和开发开辟了一条新
的途径。
材料与方法
1. 材料与试剂
杏仁醇腈酶粗酶
苦杏仁购自药店,匀浆后静止一小时离心去沉淀和油脂,再经过热变性和硫铵沉淀后得到
粗酶.
主要试剂
:由柠檬酸和柠檬酸钠配制得到

: 硫酸铵氯化锌氯化钙硫酸铜硫酸铁硫酸亚铁硫酸镁硫酸锰
(以上个试剂均属国产分析纯)
R-杏仁醇腈酶标准酶购自 Sigma 公司
苯乙氰醇购自 Sigma 公司
2. 实验方法
酶活的测定方法
原理
杏仁醇腈酶的天然作用底物为苯乙氰醇,能催化苯乙氰醇生成苯甲醛和 HCN,苯甲醛在
波长 249nm 处为最大吸收峰,而苯乙腈醇的吸收相对很小(图 1).因此可根据在 249nm 处吸光
值在单位时间内的变化,计算苯甲醛的生成速度,由苯甲醛生成的速度可计算出酶的活性。
1
1



苯甲醛

苯乙腈醇
OD

吸光值




0
220 227 234 241 248 255 262 269 276 283 290 297 304 311 318
波长(nm)
图1 苯甲醛、苯乙氰醇吸收峰

具体方法
先制备不同浓度的苯甲醛溶液,测定各自对应的 OD 值,制得苯甲醛的标准曲线(图 2)。
底物在 的条件下会进行非酶反应分解为苯甲醛和 HCN,因此要做没有酶,而只有
底物非酶反应的空白对照。酶促反