丙酮酸的测定方法.doc

实验七丙酮酸含量的测定一、实验目的掌握植物组织中丙酮酸含量测定的原理和方法。二、实验原理植物样品中的组织液,用三氯乙酸去蛋白质后,其中所含的丙酮酸可与2,4—二硝基苯肼作用,生成丙酮酸—2,4—二硝基苯腙,后者在碱性溶液中呈樱红色,其颜色可用分光光度计测量,与已知丙酮酸标准曲线进行比较,即可求得样品中丙酮酸的含量。三、实验器材与试剂1、.实验器材分光光度计;研钵;具塞刻度试管:20mL×8;容量瓶:100mL×2;移液管:1mL×15mL×4;量筒:10mL×1;离心机;天平;大蒜、大葱或洋葱2、试剂(1)8%三氯乙酸(当日配制置冰箱中备用)(2)(3)%2,4—二硝基苯肼:—二硝基苯肼100mL,溶于2mol/LHCl中配成100mL溶液,盛入棕色试剂瓶,保存于冰箱内。(4)丙酮酸钠四、:,用8%三氯乙酸溶解,转入100mL容量瓶中,并用8%三氯乙酸定容,此液为60μg/mL的丙酮酸原液。取6支试管,按下表数据配制不同浓度的丙酮酸标准液:管???号123456丙酮酸原液量(mL)%三氯乙酸量(mL)(μg/mL)%的2,4—二硝基苯肼,摇匀,,摇匀显色,在520nm波长下比色。做标准曲线。:称取植物样品(大蒜、大葱或洋葱)5g,于研钵中加入少许石英沙及少量8%三氯乙酸,仔细研成匀浆,再用8%三氯乙酸洗入100mL容量瓶中(沙留在研钵内),定容至刻度。静置30min,取10mL匀浆液离心(4000r/min)10min,取上清液备用。,加2mL8%三氯乙酸,%的2,4—二硝基苯肼溶液,摇匀,,摇匀显色。在520nm波长下比色,记录吸光度,在标准曲线上查得丙酮酸的含量。五、结果处理式中:A—标准曲线中查得的丙酮酸克数。六、思考题:测定丙酮酸含量的基本原理是什么?