两种方法检测HBsAg假阳性和假阴性影响因素的探讨.docx

两种方法检测HBsAg假阳性和假阴性影响因素的探讨,什么是阴性和阳性,阴性阳性,阴性好还是阳性好,阴性正常还是阳性正常,阴性和阳性是什么意思,检查结果阴性好还是阳性好,阴性和阳性的区别,阳性,阴性两种方法检测HBsAg假阳性和假阴性影响因素的探讨目前HBsAg的检测方法很多,但是在临床实验室检测HBsAg的方法最常用的主要是金标法和酶联免疫吸附试验(ELISA)。含HBsAg在内的乙肝两对半检测结果对升学、就业等都有着重大的影响,常常会有患者及其他工作人员反映HBsAg检验结果与其他医疗单位不一致,为此常会发生医疗纠纷。因此,提高HBsAg检测的准确性,避免假阳性和假阴性所造成的不良社会影响,是我们临床检验工作者应该重视的问题。为了减少HBsAg检测出现假阳性和假阴性,我们有必要对这种现象的原因进行分析,在实际的检测工作中,造成HBsAg检测出现假阳性和假阴性主要受以下因素影响,分述如下: ,金标法最适判读时间为15~30分钟,若时间太短就会发生一些弱阳性HBsAg标本出现假阴性。灵敏度较低,金标法>1ng/ml,而ELISA法<1ng/ml也能检出。层析过快,HBsAg-Ab1-Au还没来得及与Ab2结合就越过了检测线,这就可能造成假阴性结果。后带现象,即HBsAg的钩状效应。不管是ELISA法还是金标法,因反应原理均为“一步法”,所以当标本中HBsAg强阳性时两者均可出现后带现象,检验结果反而出现假阴性。个别标本可能存在HBsAg亚型差异而不易检出。 ,有时会在检测区出现一条颜色很浅的非特异型层析线,由于金标法主要是通过目视法判定结果,所以常会误认为假阳性,应该引起重视。为预防乙肝,部分HBsAg阴性人群在接种乙肝疫苗的1~2周内,血清中有时可检出HBsAg弱阳性,形成一过性HBsAg阳性,这可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg。建议接种乙肝疫苗后1个月内不应做HBsAg检测。笔者曾多次发现此类因为注射乙肝疫苗出现的假阳性问题,但用ELISA一步法检测仍为阴性即可消除上述干扰,其机理尚未十分清楚。汉坦病毒会造成HBsAg金标法检测假阳性,可能是汉坦病毒与HBsAg存在交叉性,易造成假阳性结果。 ,肝素抗凝血浆会增加OD值,可能与高浓度肝素具有强大的负电荷,能吸附酶标记物不易洗脱有关;EDTA、酶抑制剂(如NaN3)可抑制ELISA系统中的辣根过氧化物酶活性,造成假阴性。 ,在冰箱内保存过久的标本,血清中IgG可聚合成多聚体、AFP可形成二聚体。标本放置时间延长(如一天以上),有时抗原或抗体免疫活性减弱,便出现假阴性。因此若采血后不能及时检测,5天内检测标本分离血清置于4。C冰箱内;超过5天不能检测的,应放在-20。C低温冰箱中。低浓度HBsAg标本(弱阳性HBsAg)易受加样时间(特别是大批量标本)、试剂平衡时间、溶血程度的影响,出现假阴性。如加样时间在30分钟内的差异是最大的。高浓度HBsAg在ELISA一步法检测中易出现假阴性,即HBsAg的钩状效应。从原理来讲,一步法中HBsAg与包被板上的HBsAb及酶结合的HBsAb结合是双向的,当HBsAg浓度过高时,HBsAg与包被板上的抗体及酶结合物中的抗体均是单向结合,不能形成抗体-抗原-抗体酶复合物,使酶标记抗体在随后的洗板中洗掉,从而显出阴性结果。但是在ELISA两步法中,高浓度的HBsAg只能与包被的HBs