比尔定律,Bouguer首先发现溶液对光的吸收与液层厚度之间的关系。1760年,Lambert就此基本定律进行了数学运算,确定了相应的关系式。1833年,Brewster在提取叶绿素及胡萝卜素的研究中,注意到有机化合物的吸收光谱。然而某些作者认为比色法起始于1852年,因为在这一年,Beer参考了Bouguer和Lambert的早期著作,提出了比色法的基本定律。硫氰酸盐法和亚铁氰化物法测定铁,Nessler法测氨,硫氰酸盐法测钼,都是19世纪中叶就已提出来的方法。随着对光度分析方法的不断研究和深入,人们对分析方法的灵敏度和选择性也提出了更高的要求。在经典光度法的基础上,又发展了双波长分光光度法、动力学分光光度法等,使光度分析的内容和应用范围进一步扩大。近年来,随着有机试剂的迅猛发展,使大量的有机试剂应用到分析测试领域,灵敏度、选择性都得到了不断提高。最初,比色测定是在比色管中进行的。19世纪末,开始使用带滤光片的目视比色计。20世纪30年代,光电比色计和分光光度计才被引入实验室。20世纪初期的分光光度计多为单光束手控型。20世纪60年代,双光束自动记录光度计问世。20世纪70年代开始,微处理机控制的分光光度计不断出现。双波长分光光度计迅速发展和商品化。,除了原子的核能En,质心在空间的平动能Et外,还有电子运动能Ee,原子之间的相对振动能Ev以及分子转动能Er等。分子的总能量可写为:E=En+Ee+Ev+Er+Et由于En在一般化学实验条件下不发生变化,分子的平动能Et又比较小,因此当分子能级发生跃迁时,能量的改变为:E=Ee+Er+Ev图2-1表示双原子分子的能级图。
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