一、实验目的通过实验初步掌握外植体材料消毒、接种的无菌操作技术以及外植体初代培养的方法。二、实验原理植物组织培养是在无菌条件下对离体的植物器官或组织的培养。而植株各部分的表面携带着各种不同的微生物,所以在接种前就必须选择合适的消毒剂对外植体进行消毒,获得无菌材料进行组织培养,这是取得组织培养成功的前提和重要保证。离体器官或组织受到适当刺激,便可进行器官分化,从而实现细胞的全能性。三、实验材料、::升汞,吐温-(以各组所需为例)无菌器材:4瓶培养基,一个无菌烧杯+吸水纸,1升无菌水,大号、中号镊子各1把,1把解剖刀、1把剪刀,2个500ml烧杯非无菌材料:%升汞消毒液200ml,1个250ml消毒缸,1盏酒精灯及火机1个,1个烧杯,内装75%酒精150ml,1个烧杯,内装75%酒精及棉球,1把大号镊子、1把枝剪、1把解剖刀、1把旧牙刷,橡皮筋若干、标签纸、记号笔、洗衣粉、毛巾、喷雾器四、。,用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面,将培养基及接种用具放入超净工作台。房间用酒精喷雾降尘后打开超净工作台紫外灯及房间的紫外灯,照射约30mins;然后关闭紫外灯,打开房间换气扇以及超净工作台的风机,并微启超净工作台的玻璃挡板,通风20min后,即可进行无菌操作。,用饱满又未萌发的侧芽作为外植体(取中部的芽较好)。将外植体用手术刀切去叶片,并剥去附在茎上的叶柄及皮刺,用毛刷沾洗衣粉刷洗并在自来水下冲洗干净。吸干水份后切成约2-3cm的茎段,每段至少有1个侧芽。将处理好的外植体转入洁净的消毒缸中,用加了数滴吐温-%的升汞溶液浸泡10min。在表面灭菌过程,应不停摇动消毒缸使消毒液与外植体充分接触。,。消毒时间结束后在酒精灯火焰旁用无菌镊子将已完成表面灭菌的外植体转移到烧杯中,用无菌水清洗5
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